应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 做过western blot 的进来【有效期至08年7月1日】
汕头大学海洋科学接受调剂
41/1返回列表
查看: 146  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物

[交流] 做过western blot 的进来【有效期至08年7月1日】

用的2%的BSA 孵育4度摇床隔夜，2%BSA配制的1：500的R&D公司单克隆一抗孵育一个半小时，2%BSA配制的1：5000的金思特公司HRP二抗孵育一个半小时，Amersham的ECL盒子发光。
结果条带非常清晰，但有很多杂条带，原因是什么？一抗、二抗还需要稀释吗 ？ 还是封闭不够 ？

由于抗体比较昂贵，没做过这方面实验的请不要跟帖，谢谢 ！

[ Last edited by meizhou on 2008-6-5 at 21:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
《memory》---BarbaraStreisand
1楼 2008-06-05 17:11:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
meizhou(金币+3,VIP+0):多谢 ！
如果是背景也比较深，可能是曝光过长
非特异条带的话，可能是二抗稀释得不够（浓度过高），也可能是样品本身的问题（膜脂、糖类、浓度等）
另外，国产单抗要看看是什么动物的抗体，不一定就适合你的样品
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2008-06-05 22:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物
引用回帖:
Originally posted by xipha at 2008-6-5 22:26:
如果是背景也比较深，可能是曝光过长
非特异条带的话，可能是二抗稀释得不够（浓度过高），也可能是样品本身的问题（膜脂、糖类、浓度等）
另外，国产单抗要看看是什么动物的抗体，不一定就适合你的样品

背景还好。我做的是牛骨胳肌的两个抗原，其中一个单抗一抗用的是人抗，二抗是羊抗人；另一个一抗用的小鼠抗体，二抗是羊抗小鼠。二抗用的1：5000照他们公司技术员的方法做的，我觉得是不是有可能我反应时间有点长（室温1.5小时）？或者漂洗时间短 ？还有可能是孵育封闭不够，我是4度，2%BSA隔夜的（或者浓度不够？）。
多谢您的帮助 ！

[ Last edited by meizhou on 2008-6-6 at 00:14 ]
赞一下 回复此楼
《memory》---BarbaraStreisand
3楼2008-06-06 00:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songshu310

金虫 (小有名气)
★ ★
meizhou(金币+2,VIP+0):tx，我试试这样封闭看
我们这边做，2抗是不能超过一个小时的，另外，不知道 你2抗洗了几次，一般来说多洗几遍比较好，我一般都洗个6，7遍的。
你封闭完了，从冰箱拿出来，在室温下需要放半小时以上的，不知道你是怎样操作的。
赞一下 回复此楼
4楼2008-06-06 10:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meizhou 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291 求调剂 +37 化工2026届毕业� 2026-04-09 38/1900 2026-04-15 00:27 by lihaoda1994
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-04-14 6/300 2026-04-14 23:54 by Xurambo2014
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 13/650 2026-04-14 17:54 by lhj2009
[考研] 复试调剂 +18 积极向上； 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 296求调剂 +8 汪！？！ 2026-04-09 9/450 2026-04-14 15:15 by 逆水乘风
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 求调剂 +3 我爱高数高数爱� 2026-04-12 3/150 2026-04-14 01:00 by 王珺璞
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +11 池池池池池池 2026-04-08 11/550 2026-04-13 14:10 by 科研论
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成！
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭