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五角亭

金虫 (正式写手)

[求助] 使用酵母双杂交方法构建稳转细胞用于化合物高通量筛选求助GAL4原理 已有1人参与

本人打算做某一靶点的稳转细胞，想通过酵母双杂交系统进行构建，以用于筛选该靶点的活性化合物，现在碰到的问题是，将该靶同GAL4-DNA binding domain 连接构建成重组质粒，另一个质粒如何插入VP16-Luciferase,欢迎各位大侠，提些宝贵意见，不吝感谢！
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捉虫
1楼 2015-01-21 10:44:36
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:03:34
酵母双杂交应该体系应该很成熟了，我觉得你可以看看文献或者找一个protocol看看。
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2楼2015-01-21 10:52:03
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五角亭

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-21 10:52:03
酵母双杂交应该体系应该很成熟了，我觉得你可以看看文献或者找一个protocol看看。

谢谢，大兵，文献中都是GAL4-DBD+目标蛋白，与PG5Luc报告质粒共转染，是不是就不需要VP16，只要GAL4结合到DNA结合部位，就可激活报告基因表达，有经验的虫友们，欢迎跟帖哈，谢谢！
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捉虫
3楼2015-01-23 08:13:23
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447674

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 五角亭 at 2015-01-23 08:13:23
谢谢，大兵，文献中都是GAL4-DBD+目标蛋白，与PG5Luc报告质粒共转染，是不是就不需要VP16，只要GAL4结合到DNA结合部位，就可激活报告基因表达，有经验的虫友们，欢迎跟帖哈，谢谢！...

亲可以共享一下gal4-DBD的质粒给小弟吗？
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4楼2017-03-25 22:06:06
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