应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事
51/1返回列表
查看: 2179  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事 已有5人参与

在做原核表达，构建的重组质粒pET-32a-L，双酶切大小正确，重组质粒用T7还有特异性引物检测都正确！但是转化到BL21(DE3)的时候长了满板的菌，挑了十个菌，用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有，到底哪里出了问题？？？？后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？求各位大神指点，小女子不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-01-21 10:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-21 10:49:27
双切一下吧，在看看结果，转到BL21(DE3)后，你的质粒受到BL21(DE3)自带DNA的影响，估计PET32A(原5900)片段会跑到8000-10000左右。不行，就重做个感受态吧。...

重组质粒做了双酶切，正确呀！我再看看BL21上的重组质粒酶切结果？
赞一下 回复此楼
10楼2015-01-21 10:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:18
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:36
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很稀疏。二，三十个菌左右吧。（后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？）妥妥的没连上，有做没酶切的质粒转这个感受态吗？
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-21 10:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:29
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:41
做个空白对照，看看空载体会不会跑出条带
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-21 10:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-21 10:16:13
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很 ...

你是说用特异引物检测什么阴性对照啊？我就用了T7/T7ter还有特异性引物检测了挑的菌株，同时也检测了重组质粒！确定T7引物没有问题呀！我觉得构建的重组质粒应该是没问题的啊！现在到最后一步啦~直接提的重组质粒转化到表达菌了
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-21 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +4 Micky11223 2026-03-25 6/300 2026-03-26 08:52 by 提出方法的提出�
[考研] 总分293求调剂 +4 加一一九 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:34 by barlinike
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 292求调剂 +4 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-24 4/200 2026-03-24 16:41 by peike
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭