应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助引物设计问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 746  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

[交流] 求助引物设计问题

最近新上手设计引物,有以下几个疑问:

1 引物Tm值到底算不算酶切位点和保护碱基?我设计了一对如果算上这些,那上下游Tm完全一样;但是不算,差了28度......B)

2 如果是用TA克隆,那设计的酶切位点是否有需要加保护碱基?因为之后转表达载体时双酶切不是在T载体上切,而T载体上害怕保护碱基不够长吗?

3 Nde I作为上游引物酶切位点的优点在于切出来直接是ATG.可是这个优点到底有什么好处?

希望各位朋友指教谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-06-03 11:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

synhily

木虫 (正式写手)
★
tcxuefeng(金币+1,VIP+0):谢谢你朋友.可是关于这个问题似乎众说纷纭啊.我这边有两个实验室算,两个不算.呵呵.我也糊涂了.看来只好尽量都凑了
Tm值不算酶切位点和保护碱基。所以，你设计好了一段引物以后不要考虑其它的就可以了。否则，退火温度和GC含量会有很大变化的。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2008-06-03 12:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

张力民

铜虫 (小有名气)
★
tcxuefeng(金币+1,VIP+0):谢谢你朋友.但是真的可以不加酶切位点吗?我之后要再构建到表达载体上啊.难道可以从T载的MCS上切下然后加到PET上吗?这样不会多出来一段肽段吗?
TA连接应该不用加保护碱基，也不用加酶切位点，因为T载体会带酶切位点。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2008-06-03 12:34:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 张力民 at 2008-6-3 12:34:
TA连接应该不用加保护碱基，也不用加酶切位点，因为T载体会带酶切位点。

谢谢你朋友.但是真的可以不加酶切位点吗?我之后要再构建到表达载体上啊.难道可以从T载的MCS上切下然后加到PET上吗?这样不会多出来一段肽段吗?
赞一下 回复此楼
4楼2008-06-03 17:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民

铜虫 (小有名气)
★
tcxuefeng(金币+1,VIP+0):谢谢你
多出来的应该影响不大
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2008-06-03 18:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 学硕274求调剂 +5 Li李鱼 2026-03-26 5/250 2026-03-27 20:51 by 热情沙漠
[考研] 322求调剂 +4 旧吢 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:38 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-27 7/350 2026-03-27 15:27 by Joe率
[考研] 299求调剂 +6 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 6/300 2026-03-27 12:43 by 果果妈咪
[考研] 085600材料与化工306 +10 z1z2z3879 2026-03-21 11/550 2026-03-27 11:31 by wangjy2002
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿华理，数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 333求调剂 +7 87639 2026-03-21 12/600 2026-03-26 22:08 by 不吃魚的貓
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭