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求助引物设计问题
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最近新上手设计引物,有以下几个疑问: 1 引物Tm值到底算不算酶切位点和保护碱基?我设计了一对如果算上这些,那上下游Tm完全一样;但是不算,差了28度......B) 2 如果是用TA克隆,那设计的酶切位点是否有需要加保护碱基?因为之后转表达载体时双酶切不是在T载体上切,而T载体上害怕保护碱基不够长吗? 3 Nde I作为上游引物酶切位点的优点在于切出来直接是ATG.可是这个优点到底有什么好处? 希望各位朋友指教  谢谢 |
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