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天使之名

新虫 (小有名气)

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虫号: 1295476
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专业: 药物分析

[求助] 有关总黄酮测定的问题

在做总黄酮测定的试验中，有几个疑问，现请各虫友们慷慨给予帮助！感激不尽！
1：摸索显色条件，我用的是对照品摸索的，考察了一些因素，而且取的对照品的量都是1ml。主要因为我会觉得对照品做会比样品稳定，不知这样做是否正确？
2：如今显色条件已经摸索完毕，正进行提取方式的考察，考察了超声和冷凝回流两种方式，发现超声要优于回流，但由于必须使提取方式尽量的简单，于是不仅要减少提取次数尽量一次，而且最好将料液比也压缩，时间也不要太长。但存在的问题有二：吸光度值最好要在0.3-0.7；提取后的残渣保证基本无总黄酮存在，就是总黄酮的得率。今天试验的时候根据前几天的实验总结，我用料液比0.5:50超声1h,过滤，全部浓缩至10ml容量瓶，提取溶剂考察的是60%乙醇提取，但复溶的时候用的是纯甲醇（前面摸索显色条件用的），是可以被纯甲醇溶解10ml容量瓶中的，为了使吸光度值达到0.3-0.7的范围，我在测定吸光度的时候取了4ml的样品量再加显色剂显色，测定的吸光度就达到了0.9几，显然太大，我又突然想起做摸索显色条件时用的对照品是1ml，而其他条件与摸索显色条件是一样的，这样岂不是没有达到平行？但吸光度既然增加了（样品量增加），是不是又说明我的显色剂还是过量的原因呢？？然后参比溶液用的是不加显色剂的样品溶液，其实起的也是扣除显色剂本身吸收的干扰的作用呢？？
3：原先实验想采用超声一次后补重直接取上清滤过测定的方式（更简单），做了三次，有两次超声前后重量根本没有变化，很奇怪？！还有就是这样即使取了4ml的上清的量，测出来的吸光度值都没有达到0.2，所以后面才采取了浓缩。
4：称量的粉末量/最后定容的量是什么的浓度呢？样品的浓度？生药浓度？还是什么？如果补重了，再过滤浓缩的话，最后定容浓度又是怎么算的呢？
5：有关总黄酮测定，若大家有什么经验或好的建议，请多多指教！！！

以上零碎的几个在实验中想到与碰到的问题，请各位有经验的虫友们不吝赐教啊！万分感谢！！！十分捉急哇！！！

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