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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半定量pcr一直做不出，很痛苦！
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-12 21:44:58
RNA应该还可以，问了一下别人，也说内参应该扩得出。同一管cDNA内参有时扩得出有时扩不出，总是不稳定。我这边pcr仪挂壁比较严重，P完后25ul有10多ul挂在壁上，这个影响大么？...

这应该是加热蒸发导致的，PCR仪应该没热该，加矿物油覆盖了没？
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
11楼2015-01-15 08:42:11
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押沙龙1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-01-15 08:42:11
这应该是加热蒸发导致的，PCR仪应该没热该，加矿物油覆盖了没？...

没有加矿物油。那PCR仪可以设置热盖温度么？我以前都没有注意这个，，，
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牵牛花呀，一朵深渊色。
12楼2015-01-15 09:19:48
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-14 17:04:19
哦哦，请问你做过半定量没？我是新手，很多地方都不太懂，现在做得都不知道能不能回家过年了，，，希望能够向你多多请教！...

我做的是荧光定量，你那挥发严重的话就覆盖点矿物油吧，这样误差会小一点的。
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13楼2015-01-15 10:32:58
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-15 09:19:48
没有加矿物油。那PCR仪可以设置热盖温度么？我以前都没有注意这个，，，...

每个PCR仪不一样，好点的会有，半定量是可以加矿物油的，加一层油吧
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
14楼2015-01-16 10:53:56
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押沙龙1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-15 10:32:58
我做的是荧光定量，你那挥发严重的话就覆盖点矿物油吧，这样误差会小一点的。...

恩，我试一下，多谢指点哈！！！
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牵牛花呀，一朵深渊色。
15楼2015-01-16 11:07:49
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

晕死，你的PCR仪没有热盖的吗。我同学加石蜡油可以不盖盖子跑也没问题。这样基本是你PCR的问题吧
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16楼2015-01-21 17:12:02
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crescent010

铁虫 (初入文坛)
大神你还在做热激转录因子么？能问下你有没有克隆热激转录因子基因么？我有些问题想请教一下
你的转录因子是从转录组中找的么？orf是否完整？
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17楼2015-05-11 16:08:50
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by crescent010 at 2015-05-11 16:08:50
大神你还在做热激转录因子么？能问下你有没有克隆热激转录因子基因么？我有些问题想请教一下
你的转录因子是从转录组中找的么？orf是否完整？

熱激轉錄因子 HSF家族的嗎？

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天道酬勤
18楼2015-05-11 22:58:59
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liling0601

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-14 17:04:19
哦哦，请问你做过半定量没？我是新手，很多地方都不太懂，现在做得都不知道能不能回家过年了，，，希望能够向你多多请教！...

我老板出国一年，9月份回来，我也研二，也是很无力啊，过年都没希望回家了
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19楼2015-05-26 16:59:24
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

RNA自身是容易降解的，可能楼主提取到的量不够，我觉得还是要先从提量着手。听我师兄说他们用的BIOG RNA Tissue Kit从各种组织样本中提取基因组RNA，可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
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20楼2019-03-27 15:19:13
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