应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
1321/3返回列表123下一页
查看: 6602  |  回复: 131
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nlbtr

铜虫 (小有名气)

[交流] 市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多

前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。
   
   既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……，简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。

   就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告）

这里来分享一下支原体检测方法：

1，PCR检测法。
（1） 细胞铺24孔板，5x104个/孔；
（2） 每隔1d取细胞培养液留样，连取3d；
（3） 细胞培养液95℃水浴加热5min，12000rpm离心1min，取上清做下一步的巢式PCR检测；
（4） 巢式PCR第一轮体系和程序：
                                                                 体系：模板：4步骤所得细胞培养液  2ul
                                                                  Primer-F(10mM):                     1ul                 
                                                                  Primer-R(10mM):                    1ul
                                                                  dNTP Mixture(10mM each):     1ul  
                                                                  Taq酶(2u/ul)：                        0.5ul
                                                                 10XTaq酶buffer：                    5ul
                                                                 H2O:                                       39.5ul
                                                                 Total                                        50ul

                                                                程序：       95℃  2min      cycles    1x
                                                                                  95℃  20S
                                                                                  55℃  20S
                                                                                  72℃  2min
                                                                                  72℃  6min      cycles    1x
                                                                                  4℃   hold
（5） 巢式PCR第二轮体系和程序：
                                                               体系：模板：一轮PCR产物         2ul
                                                               Primer-F2(10mM):                      1ul                 
                                                               Primer-R2(10mM):                     1ul
                                                               dNTP Mixture(10mM each):       1ul  
                                                               Taq酶(2u/ul)：                        0.5ul
                                                              10XTaq酶buffer：                       5ul
                                                               H2O:                                     39.5ul
                                                               Total                                       50ul
                                                
                                                              程序：       95℃  2min      cycles    1x
                                                                               95℃  20S
                                                                               55℃  20S
                                                                               72℃  1min
                                                                               72℃  6min      cycles    1x
                                                                               4℃   hold
（6） 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。

市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg
    这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。

2，DNA萤光染色法
    利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。
市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多-1
MycoplasmaOUT处理细胞前


市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多-2
MycoplasmaOUT处理细胞后

   由于是细胞里用的产品，抗生素类的最好谨慎使用，这里有个之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽类型的，处理时间也短，只要3天就可以了，而且对细胞也无毒无害。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学 生工检测理论与实务 细胞、细菌相关

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

susanuse

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2015-01-12 15:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁山清雪

新虫 (初入文坛)
是的，我的就污染了，黑黑小虫子好恶心，
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-12 15:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Catherine92

金虫 (小有名气)
这么恐怖？前两天实验室刚买的胎牛血清。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-12 15:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
blessing
回复此楼
25楼2015-01-12 15:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
blessing
回复此楼
26楼2015-01-12 16:00:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dolly8242

木虫 (著名写手)
★
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
搞合成的表示看不懂搞生物的...............
赞一下 回复此楼
36楼2015-01-12 16:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jx3551992

银虫 (正式写手)
★
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
祝好
回复此楼
49楼2015-01-12 16:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dmbb4楼
2015-01-12 15:28   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
假大空5楼
2015-01-12 15:37   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
syhorchid6楼
2015-01-12 15:37   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
readytogo7楼
2015-01-12 15:38   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
shcj8楼
2015-01-12 15:40   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
54smile晓9楼
2015-01-12 15:43   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
寻找cock10楼
2015-01-12 15:45   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
ashlink11楼
2015-01-12 15:47   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
wangyang788712楼
2015-01-12 15:48   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
chenjiantao13楼
2015-01-12 15:50   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
bjb9814楼
2015-01-12 15:50   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
祝福
linkuodong15楼
2015-01-12 15:50   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
springsunyj16楼
2015-01-12 15:50   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
jiaoxg17楼
2015-01-12 15:51   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
mzhyan18楼
2015-01-12 15:52   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
soulicct19楼
2015-01-12 15:54   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
阿Q~~20楼
2015-01-12 15:55   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
张季风21楼
2015-01-12 15:56   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
hydzp22楼
2015-01-12 15:56   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
suzhoulj6623楼
2015-01-12 15:57   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
erjianxin24楼
2015-01-12 15:58   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
张季风27楼
2015-01-12 16:01   回复  
落花剑雨28楼
2015-01-12 16:03   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
dyh197829楼
2015-01-12 16:03   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
106588810230楼
2015-01-12 16:05   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
woxue_88831楼
2015-01-12 16:07   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
gltsycw32楼
2015-01-12 16:08   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
deweini33楼
2015-01-12 16:10   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
宝贝乖乖快来34楼
2015-01-12 16:13   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
zhchzhsh207635楼
2015-01-12 16:14   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
spc0837楼
2015-01-12 16:17   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
hailinsu12338楼
2015-01-12 16:21   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
血性红魔39楼
2015-01-12 16:21   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
liucheng88340楼
2015-01-12 16:22   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
dpabzh41楼
2015-01-12 16:23   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
a8605242楼
2015-01-12 16:24   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
gengxin6043楼
2015-01-12 16:29   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
ultrav63144楼
2015-01-12 16:32   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
slytjiaofei45楼
2015-01-12 16:35   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
kiss2008553746楼
2015-01-12 16:38   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
nono200947楼
2015-01-12 16:44   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
qqaoqq48楼
2015-01-12 16:45   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
tzynew50楼
2015-01-12 16:47   回复  
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 nlbtr 的主题更新
1321/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +3 jackleilei 2026-09-03 3/150 2026-09-03 19:13 by god_tian
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 7/350 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 11/550 2026-09-03 18:42 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 10/500 2026-09-03 16:27 by T0rGB46095mJ
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 14:48 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +8 gdd2018 2026-08-28 13/650 2026-09-03 06:22 by 羽毛枫f
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-03 03:14 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭