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市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
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前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染 。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊  ，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……， 简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商  ……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告） 这里来分享一下支原体检测方法：1，PCR检测法。 （1） 细胞铺24孔板，5x104个/孔； （2） 每隔1d取细胞培养液留样，连取3d； （3） 细胞培养液95℃水浴加热5min，12000rpm离心1min，取上清做下一步的巢式PCR检测； （4） 巢式PCR第一轮体系和程序： 体系：模板：4步骤所得细胞培养液 2ul Primer-F(10mM): 1ul Primer-R(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 2min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （5） 巢式PCR第二轮体系和程序： 体系：模板：一轮PCR产物 2ul Primer-F2(10mM): 1ul Primer-R2(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 1min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （6） 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。  2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg 这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。 2，DNA萤光染色法 利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。  MycoplasmaOUT处理细胞前  MycoplasmaOUT处理细胞后 由于是细胞里用的产品，抗生素类的最好谨慎使用，这里有个之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽类型的，处理时间也短，只要3天就可以了，而且对细胞也无毒无害。 |
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