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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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铜虫 (小有名气)


[交流] 市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的,支原体太多

前段时间有个同学因为细胞状态不好,培养基里有小黑点,怀疑是支原体污染。于是检测了一下,果真是的,就买了支原体清除剂。别说效果还真好,3天后细胞状态就好了。
   
   既然细胞状态好了,就停用了,没想到一停用,细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行,就问到了我,既然这些因素都排除了,最后只有一个可能了,刚买的Gibco的胎牛血清,本来心里还想,同学实验室真是土豪啊,我就问了价格,南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……,简直惊讶到了,现在Gibco的血清简直是一货难求,澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。

   就断定这个血清肯定是假的,用检测试剂盒检测了一下,果然是这个问题,假血清真是害人啊,这些无良奸商……由于支原体比较小,滤器过滤不掉,所以大家买血清的时候一定要先试用,检测一下支原体(现在好多大牌子都会有支原体检测报告)

这里来分享一下支原体检测方法:

1,PCR检测法。
(1) 细胞铺24孔板,5x104个/孔;
(2) 每隔1d取细胞培养液留样,连取3d;
(3) 细胞培养液95℃水浴加热5min,12000rpm离心1min,取上清做下一步的巢式PCR检测;
(4) 巢式PCR第一轮体系和程序:
                                                                 体系:模板:4步骤所得细胞培养液  2ul
                                                                  Primer-F(10mM):                     1ul                 
                                                                  Primer-R(10mM):                    1ul
                                                                  dNTP Mixture(10mM each):     1ul  
                                                                  Taq酶(2u/ul):                        0.5ul
                                                                 10XTaq酶buffer:                    5ul
                                                                 H2O:                                       39.5ul
                                                                 Total                                        50ul

                                                                程序:       95℃  2min      cycles    1x
                                                                                  95℃  20S
                                                                                  55℃  20S
                                                                                  72℃  2min
                                                                                  72℃  6min      cycles    1x
                                                                                  4℃   hold
(5) 巢式PCR第二轮体系和程序:
                                                               体系:模板:一轮PCR产物         2ul
                                                               Primer-F2(10mM):                      1ul                 
                                                               Primer-R2(10mM):                     1ul
                                                               dNTP Mixture(10mM each):       1ul  
                                                               Taq酶(2u/ul):                        0.5ul
                                                              10XTaq酶buffer:                       5ul
                                                               H2O:                                     39.5ul
                                                               Total                                       50ul
                                                
                                                              程序:       95℃  2min      cycles    1x
                                                                               95℃  20S
                                                                               55℃  20S
                                                                               72℃  1min
                                                                               72℃  6min      cycles    1x
                                                                               4℃   hold
(6) 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。

市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的,支原体太多
2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg
    这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的,只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。

2,DNA萤光染色法
    利用萤光染剂(bisbenzimide, Hoechst 33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体之污染。
市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的,支原体太多-1
MycoplasmaOUT处理细胞前


市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的,支原体太多-2
MycoplasmaOUT处理细胞后

   由于是细胞里用的产品,抗生素类的最好谨慎使用,这里有个之前使用MycoplasmaOUT™,是抗菌肽类型的,处理时间也短,只要3天就可以了,而且对细胞也无毒无害。
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雁山清雪

新虫 (初入文坛)


是的,我的就污染了,黑黑小虫子好恶心,
2楼2015-01-12 15:22:47
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Catherine92

金虫 (小有名气)


这么恐怖?前两天实验室刚买的胎牛血清。。。。
3楼2015-01-12 15:27:06
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)



nlbtr(金币+1): 谢谢参与
blessing
25楼2015-01-12 15:58:31
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)


blessing
26楼2015-01-12 16:00:12
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dolly8242

木虫 (著名写手)



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搞合成的表示看不懂搞生物的...............
36楼2015-01-12 16:16:35
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jx3551992

银虫 (正式写手)



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祝好
49楼2015-01-12 16:47:40
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dmbb4楼
2015-01-12 15:28   回复  
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假大空5楼
2015-01-12 15:37   回复  
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syhorchid6楼
2015-01-12 15:37   回复  
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readytogo7楼
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shcj8楼
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寻找cock10楼
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ashlink11楼
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bjb9814楼
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祝福
linkuodong15楼
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jiaoxg17楼
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阿Q~~20楼
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