| 查看: 6601 | 回复: 131 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
|
||||||
前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染 。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊  ，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……， 简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商  ……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告） 这里来分享一下支原体检测方法：1，PCR检测法。 （1） 细胞铺24孔板，5x104个/孔； （2） 每隔1d取细胞培养液留样，连取3d； （3） 细胞培养液95℃水浴加热5min，12000rpm离心1min，取上清做下一步的巢式PCR检测； （4） 巢式PCR第一轮体系和程序： 体系：模板：4步骤所得细胞培养液 2ul Primer-F(10mM): 1ul Primer-R(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 2min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （5） 巢式PCR第二轮体系和程序： 体系：模板：一轮PCR产物 2ul Primer-F2(10mM): 1ul Primer-R2(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 1min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （6） 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。  2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg 这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。 2，DNA萤光染色法 利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。  MycoplasmaOUT处理细胞前  MycoplasmaOUT处理细胞后 由于是细胞里用的产品，抗生素类的最好谨慎使用，这里有个之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽类型的，处理时间也短，只要3天就可以了，而且对细胞也无毒无害。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物学 | 生工检测理论与实务 | 细胞、细菌相关 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
susanuse» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有10人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有14人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有13人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
云南大学丁军桥团队2027年博士招生
+1/807
-
2027级博士研究生——质谱分析
+5/100
-
江西理工大学稀土学院博士招聘（安家费启动金等合计超100w）
+1/97
-
课题组招推免硕士和直博生。华中科技大学光电学院发光材料与器件团队。
+1/94
-
上海交通大学周宝文课题组招收2027年申请考核制博士研究生
+1/91
-
复旦大学芯片与系统前沿技术研究院 朱忠赟珅 课题组招收2027级博士研究生
+1/83
-
香港城市大学分子电子学方向招收2027年夏季和秋季入学博士生
+1/58
-
神经生物学，基础医学，科研助理招聘
+1/25
-
评职称需要，卖发明专利了:D有技术储备需求的设备厂商可联系
+1/18
-
山东大学-山东字节信息智能技术实验室2026年招聘博士后
+2/14
-
新加坡国立大学Sibudjing Kawi教授课题组招聘博士后（热催化/等离子体催化方向）
+1/12
-
北京科技大学能源与环境工程学院 博士、博士后招聘启事
+1/11
-
新加坡国立大学Sibudjing Kawi教授课题组part-time PhD（热催化/等离子体催化方向）
+1/11
-
石蜡切片VS冰冻切片：哪种更适合免疫荧光检测？
+1/9
-
上海交通大学纳米光子学实验室招收直博生（2027级）
+1/6
-
中国地质大学（北京）人工智能、电子信息方向招收博士硕士研究生（长期有效）
+1/6
-
慢性阻塞性肺疾病（COPD）多因子蛋白检测：挖掘炎症损伤分子机制
+1/4
-
【科研诚信】武汉轻工大学何江玲3篇论文：涉嫌抄袭、成组数据重复、制造虚假显著
+1/3
-
硅纳米颗粒诱导肺损伤相关中性粒细胞胞外诱捕网机制
+1/3
-
义翘神州推出全长p-Tau217蛋白，助力阿尔茨海默病下一代生物标志物检测开发
+1/2
36楼2015-01-12 16:16:35
2楼2015-01-12 15:22:47
3楼2015-01-12 15:27:06
简单回复
假大空5楼
2015-01-12 15:37
回复
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
