| 查看: 4491 | 回复: 131 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
|
|||
前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染 。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊  ，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……， 简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商  ……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告） 这里来分享一下支原体检测方法：1，PCR检测法。 （1） 细胞铺24孔板，5x104个/孔； （2） 每隔1d取细胞培养液留样，连取3d； （3） 细胞培养液95℃水浴加热5min，12000rpm离心1min，取上清做下一步的巢式PCR检测； （4） 巢式PCR第一轮体系和程序： 体系：模板：4步骤所得细胞培养液 2ul Primer-F(10mM): 1ul Primer-R(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 2min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （5） 巢式PCR第二轮体系和程序： 体系：模板：一轮PCR产物 2ul Primer-F2(10mM): 1ul Primer-R2(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 1min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （6） 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。  2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg 这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。 2，DNA萤光染色法 利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。  MycoplasmaOUT处理细胞前  MycoplasmaOUT处理细胞后 由于是细胞里用的产品，抗生素类的最好谨慎使用，这里有个之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽类型的，处理时间也短，只要3天就可以了，而且对细胞也无毒无害。 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
susanuse» 猜你喜欢
申请2024或2025年博士研究生
已经有12人回复
-
在大地上我们只过一生---看完我的阿勒泰上头了好几天，完结那天晚上几乎失眠
已经有13人回复
-
双非本科毕业论文，气人
已经有12人回复
-
化学B02口青基 代表作都是什么水平的？向大佬求助
已经有10人回复
-
每到中夜，情难自抑
已经有57人回复
-
化学口B0109(高分子合成)，拿青年基金一般需要怎样的文章水平？
已经有22人回复
-
每天学术时间不能保证，能保证的只有：
已经有10人回复
-
研0二导师分到新来的博士后靠谱吗
已经有7人回复
-
研究生在毕业答辩时挂了，遗憾
已经有13人回复
-
24年博士招生
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
北京工业大学/河北大学临床医学院医工交叉课题组长期诚聘师资博后
+1/678
-
复旦大学胶体材料联培博士招生
+2/126
-
华中科技大学杨辉教授团队招聘 博士后 和 研究助理 ： 力学、材料、电化学等背景
+1/79
-
**待遇优厚**大湾区大学（筹）苏强课题组【诚聘量子点发光器件方向博士后、特任研究员
+2/62
-
上市公司高薪诚聘硕博研发管培生/研发工程师；坐标上海；”职”为你来
+1/37
-
西湖大学工学院李秋珵实验室科研助理招聘启事
+1/36
-
重庆大学机械与运载工程学院曹华军教授课题组诚聘博士后
+1/34
-
香港大学化学系招聘过渡金属催化方向博士后
+1/32
-
中科院深圳先进院成会明院士团队招聘二氧化碳催化转化方向博士后、研究助理
+1/31
-
海南大学田新龙团队，诚聘海洋化学方向青年教授和博士后！
+1/28
-
哈工大郑州研究院刘绍琴教授课题组诚招优秀人才加盟！长期有效
+1/25
-
2024年高分子材料学科招聘优秀人才和
+1/8
-
欧盟地平线项目 法国-瑞典 全奖博士
+1/5
-
城乡规划乙级资质申请标准要求？
+1/4
-
2024中国科学院苏州纳米所夏令营-宽禁带半导体超快光电子
+1/4
-
上海交通大学高分子/光化学方向招聘博士后/科研助理
+1/4
-
广州医科大学组织修复与疾病诊断用生物高分子材料课题组诚聘博士后（合同可签3年）
+1/4
-
哈工大 张乃庆课题组 招收2025级硕士推免/直博研究生
+1/3
-
中科院上海硅酸盐所“宏观有限元模拟计算及人工智能方向”招聘有编制工作人员
+1/3
-
深圳理工大学药学院殷勤课题组招聘有机合成或药物化学博士后
+1/2
+1/678
123楼2015-06-23 11:07:04
2楼2015-01-12 15:22:47
3楼2015-01-12 15:27:06
简单回复
假大空5楼
2015-01-12 15:37
回复
nlbtr(金币+1): 谢谢参与
