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hj2013china

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[求助] 如何分离相差12bp的DNA片段急急急！已有11人参与

怎么分离相差12bp的DNA片段，求助高手

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【求助/交流】怎么样跑琼脂糖凝胶电泳能将250bp 和290 bp的片段分离已经有28人回复

1楼 2015-01-06 17:32:17

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titus0805

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跑聚丙烯酰胺的胶，很容易分出来。有专门回收聚丙烯酰胺胶的试剂盒。

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5楼2015-01-07 11:17:46

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781055707

木虫 (著名写手)

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你看看两条片段上的不同酶切位点，用内切酶把一条切断，剩下的90%里就都是另一条了。或者跑PCR，连T载体，在筛。

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采菊东篱下，悠然见南山。

4楼2015-01-07 10:11:07

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oO晶锅Oo

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我做过60 nt+12 nt的琼脂糖电泳，用4%琼脂糖电泳，40分钟，电压80 V以下，不用变性，不会弥散，看位置差异没有问题，胶回收没做。不知道你的目的片段是多少bp？告诉我可以继续回复你。

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9楼2015-01-07 16:31:05

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红卫大兵

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你跑2%的胶，然后多跑点时间2h，低电压

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2楼2015-01-06 18:02:33

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鬼羽帝魂

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这个真的不好搞

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3楼2015-01-07 09:43:52

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titus0805

铁虫 (小有名气)

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就一般做ssr的小板就可以，很多ssr都是差距在10几个bp的

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6楼2015-01-07 11:20:40

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fuyuandj86

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聚丙烯酰胺尿素胶足够区分，但是双链DNA的两条链也会分开，你切胶回收以后要重新把两条链混合在一起

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

7楼2015-01-07 12:41:51

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titus0805

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7楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-01-07 12:41:51
聚丙烯酰胺尿素胶足够区分，但是双链DNA的两条链也会分开，你切胶回收以后要重新把两条链混合在一起

变性对page胶分辨率没有什么影响吧，除非是结构复杂的长链DNA。用非变性的应该就行了。

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8楼2015-01-07 12:51:57

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daniel1112

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一般的琼脂糖胶不行，经济允许的话可以使用bio-red分离10～200bp的琼脂糖，有些贵，好像是580多美元100克。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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10楼2015-01-07 23:44:27

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