24小时热门版块排行榜    

查看: 3338  |  回复: 23

puddylee

新虫 (小有名气)

果断换酶啊

[ 发自小木虫客户端 ]
21楼2015-01-08 15:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

berry94

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-01-07 12:28:14
合成吧。也不长。

不能合成的,因为这是个未知基因,只是转录组测序得到的结果呢
实验快快出结果
22楼2015-01-14 10:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunfengqing7

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

GC-buffer有两种,可以加DMSO和甘油,还有就是调退火温度,还可以做降落,反正各种条件一顿乱试,运气好点就p出来了

GC含量那么高,而且又是1200bp的模板,普通酶应该扩增不出来,最好是使用专门用于长片段扩增的酶,也不要盲目的只选择高保真酶,毕竟高保真酶还是保真性居首位,不一定能对长片段的进行扩增啊。
对于高GC的模板,优化是一定不能少的,如果你购买的试剂盒中有直接是供高GC扩增的buffer的话,是最好的,这样就不用额外进行镁离子、DMSO的优化了,操作起来简单方便的,如果有热启动又长片段扩增的 最好不过了 (现在市场上极少极少的)
选酶是关键,buffer也是关键
希望有所帮助哦
23楼2015-01-15 20:20:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

P高GC含量的,一般在反应体系中加入终浓度为4%左右的二甲基亚砜(DMSO),不过现在有公司生产专门P高GC含量产物的酶,他们已经给你加好了,而且优化的不错,你可以直接买来做。另外长片段扩增成功的关键是设计30个碱基以上的长引物,提高产物特异性,所以建议你把引物设计的长一点,使其退火温度达到60度以上甚至更高,然后两步法扩增(就是把退火和延伸压缩成一步进行,一边退火一边延伸),延伸温度由原来的72度改成你的引物退火温度
24楼2015-01-16 10:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 berry94 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿山东大学材料与化工325求调剂 +5 半截的诗0927 2026-03-02 5/250 2026-03-02 18:37 by 明亮9527
[考研] 接收调剂 +6 津萌津萌 2026-03-02 13/650 2026-03-02 18:34 by fengyuling00
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:07 by 2103240126
[考研] 299求调剂 +4 kkcoco25 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:04 by barlinike
[考研] 环境调剂 +3 chenhanheng 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:37 by houyaoxu
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 14/700 2026-03-02 16:09 by 今夏不夏
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考研] 0856调剂 +7 刘梦微 2026-02-28 7/350 2026-03-02 14:11 by liyongv
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 化工270求调剂 +8 什么名字qwq 2026-03-02 8/400 2026-03-02 13:03 by houyaoxu
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[考研] 284求调剂 +10 天下熯 2026-02-28 11/550 2026-03-02 11:03 by 无际的草原
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 7/350 2026-03-02 10:38 by lature00
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
信息提示
请填处理意见