24小时热门版块排行榜

返回列表

puddylee

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 125.9
帖子: 59
在线: 20.7小时
虫号: 1831411
注册: 2012-05-23
专业: 消化道内环境紊乱、黏膜屏

果断换酶啊

[ 发自小木虫客户端 ]

回复此楼

21楼2015-01-08 15:31:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

berry94

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 10
散金: 10
帖子: 36
在线: 8.8小时
虫号: 2877739
注册: 2013-12-17
性别: MM
专业: 细胞增殖、生长与分化

引用回帖:

17楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-01-07 12:28:14
合成吧。也不长。

不能合成的，因为这是个未知基因，只是转录组测序得到的结果呢

赞一下

回复此楼

实验快快出结果

22楼2015-01-14 10:44:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yunfengqing7

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 15.5
帖子: 5
在线: 2小时
虫号: 3647358
注册: 2015-01-15
专业: 细胞增殖、生长与分化

【答案】应助回帖

GC-buffer有两种，可以加DMSO和甘油，还有就是调退火温度，还可以做降落，反正各种条件一顿乱试，运气好点就p出来了

GC含量那么高，而且又是1200bp的模板，普通酶应该扩增不出来，最好是使用专门用于长片段扩增的酶，也不要盲目的只选择高保真酶，毕竟高保真酶还是保真性居首位，不一定能对长片段的进行扩增啊。
对于高GC的模板，优化是一定不能少的，如果你购买的试剂盒中有直接是供高GC扩增的buffer的话，是最好的，这样就不用额外进行镁离子、DMSO的优化了，操作起来简单方便的，如果有热启动又长片段扩增的最好不过了（现在市场上极少极少的）
选酶是关键，buffer也是关键
希望有所帮助哦

赞一下

回复此楼

23楼2015-01-15 20:20:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

快乐农夫

木虫 (正式写手)

应助: 16 (小学生)
金币: 3225.6
散金: 200
红花: 7
帖子: 859
在线: 240.9小时
虫号: 2379017
注册: 2013-03-26
性别: GG
专业: 观赏园艺学

【答案】应助回帖

P高GC含量的，一般在反应体系中加入终浓度为4%左右的二甲基亚砜（DMSO)，不过现在有公司生产专门P高GC含量产物的酶，他们已经给你加好了，而且优化的不错，你可以直接买来做。另外长片段扩增成功的关键是设计30个碱基以上的长引物，提高产物特异性，所以建议你把引物设计的长一点，使其退火温度达到60度以上甚至更高，然后两步法扩增（就是把退火和延伸压缩成一步进行，一边退火一边延伸），延伸温度由原来的72度改成你的引物退火温度

赞一下

回复此楼

24楼2015-01-16 10:04:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 berry94 的主题更新

返回列表