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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物严重拖尾
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sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] PCR产物严重拖尾

我在做PCR时出现严重拖尾现象，不知道是怎么回事，请高手指点
   我的目的片段大约为100bp，利用的反应体系如下：
94 度，4分钟
94 度     30 秒
60 度    30 秒
72  度   30 秒   
30个循环
72 度10分钟
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111111
1楼 2008-05-29 15:41:10
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Sanger882

银虫 (小有名气)
楼主最好上个电泳图，才可能作出正确的判断，
       还有就是不知道你的引物序列如何？
   一般来说可通过如下途径减少拖带：
     1：模板量加多了，适当减少
     2：适当提高退火温度
     3：增加循环数（35循环试试）
     4：减少酶量（25UL体系加1.5ULtaq就可以了）
     5：100bp的片段根本就无需30 秒延伸的，10秒足矣。
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信念之火一旦燃烧，再大的暴风雨也无法阻挡！
2楼2008-05-29 18:58:00
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playboy723

金虫 (正式写手)
模板的问题    可能是模板降解了    提高点退火温度也会好些
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3楼2008-05-29 21:07:10
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dk83078

新虫 (初入文坛)

我

遇到过，期待着你们的问题解决呢
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4楼2008-05-31 13:31:42
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RyanV

铁虫 (初入文坛)
建议用两步PCR
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5楼2008-06-03 14:35:32
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lybio

金虫 (正式写手)
要扩增的PCR长度过短，你可以先P含有此段基因较长的DNA片段，然后再以它为模板，进一步PCR，可以减少非特异片段
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6楼2008-06-03 19:59:09
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sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)
两步PCR咋做啊。我还不会啊
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111111
7楼2008-06-04 09:56:32
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