24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 863  |  回复: 6
当前主题已经存档。

sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] PCR产物严重拖尾

我在做PCR时出现严重拖尾现象,不知道是怎么回事,请高手指点
   我的目的片段大约为100bp,利用的反应体系如下:
94 度,4分钟
94 度     30 秒
60 度    30 秒
72  度   30 秒   
30个循环
72 度10分钟
回复此楼
111111
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sanger882

银虫 (小有名气)

楼主最好上个电泳图,才可能作出正确的判断,
       还有就是不知道你的引物序列如何?
   一般来说可通过如下途径减少拖带:
     1:模板量加多了,适当减少
     2:适当提高退火温度
     3:增加循环数(35循环试试)
     4:减少酶量(25UL体系加1.5ULtaq就可以了)
     5:100bp的片段根本就无需30 秒延伸的,10秒足矣。
信念之火一旦燃烧,再大的暴风雨也无法阻挡!
2楼2008-05-29 18:58:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)

模板的问题    可能是模板降解了    提高点退火温度也会好些
3楼2008-05-29 21:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dk83078

新虫 (初入文坛)

遇到过,期待着你们的问题解决呢
4楼2008-05-31 13:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RyanV

铁虫 (初入文坛)

建议用两步PCR
5楼2008-06-03 14:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

要扩增的PCR长度过短,你可以先P含有此段基因较长的DNA片段,然后再以它为模板,进一步PCR,可以减少非特异片段
6楼2008-06-03 19:59:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)

两步PCR咋做啊。我还不会啊
111111
7楼2008-06-04 09:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sxtx0607 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +5 YYYYYNNNNN 2026-03-26 6/300 2026-03-28 17:50 by 狂炫麦当当
[考研] 0703化学求调剂 +9 奶油草莓. 2026-03-22 10/500 2026-03-28 13:30 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 277跪求调剂 +5 1915668 2026-03-27 9/450 2026-03-28 09:58 by zhshch
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +9 丹青奶盖 2026-03-26 10/500 2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-03-24 9/450 2026-03-27 15:34 by 超级伊昂大王
[考研] 085600,材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
信息提示
请填处理意见