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sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] PCR产物严重拖尾

我在做PCR时出现严重拖尾现象,不知道是怎么回事,请高手指点
   我的目的片段大约为100bp,利用的反应体系如下:
94 度,4分钟
94 度     30 秒
60 度    30 秒
72  度   30 秒   
30个循环
72 度10分钟
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111111
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Sanger882

银虫 (小有名气)

楼主最好上个电泳图,才可能作出正确的判断,
       还有就是不知道你的引物序列如何?
   一般来说可通过如下途径减少拖带:
     1:模板量加多了,适当减少
     2:适当提高退火温度
     3:增加循环数(35循环试试)
     4:减少酶量(25UL体系加1.5ULtaq就可以了)
     5:100bp的片段根本就无需30 秒延伸的,10秒足矣。
信念之火一旦燃烧,再大的暴风雨也无法阻挡!
2楼2008-05-29 18:58:00
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playboy723

金虫 (正式写手)

模板的问题    可能是模板降解了    提高点退火温度也会好些
3楼2008-05-29 21:07:10
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dk83078

新虫 (初入文坛)

遇到过,期待着你们的问题解决呢
4楼2008-05-31 13:31:42
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RyanV

铁虫 (初入文坛)

建议用两步PCR
5楼2008-06-03 14:35:32
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lybio

金虫 (正式写手)

要扩增的PCR长度过短,你可以先P含有此段基因较长的DNA片段,然后再以它为模板,进一步PCR,可以减少非特异片段
6楼2008-06-03 19:59:09
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sxtx0607

铁杆木虫 (正式写手)

两步PCR咋做啊。我还不会啊
111111
7楼2008-06-04 09:56:32
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