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lcl602169289

金虫 (小有名气)

[求助] 求一道简答题的答案 已有1人参与

求一道简答题的答案,非生命科学专业小白求大侠赐教,不胜感激。题目如下:在实验中我们发现药物处理后的 TNF 受体相关因子6 (TRAF6)蛋白的表达明显减少,通过TargetScan 靶基因预测网站发现miR-146a 或miR-30b 可能作用于TRAF6 的mRNA。请问:如何用实验证实miR-146a 或miR-30b 谁作用于TRAF6 的mRNA。
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
lcl602169289: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 泪流满面,感谢大侠出手相助! 2015-01-04 10:27:39
分3组:普通细胞,转染miR-146a(或表达miR-146a的质粒)的细胞,转染miR-30b(或表达miR-30b的质粒)的细胞。用特定药物诱导TRAF6表达。一定时间后(比如1 h、2 h、6 h、12 h、24 h)收集细胞RNA样品和蛋白质样品,用RT-qPCR检测TRAF6的mRNA水平,用WB检测TRAF6的蛋白质水平。因为miR的作用是减少目的mRNA,所以当某样品中TRAF6的mRNA或蛋白质水平减少或增加,判断出哪个miR起作用。(miR直接作用于TRAF6的结果是使其mRNA减少;如果TRAF6反而增加,可能是miR作用于TRAF6的负调控基因)
2楼2015-01-04 09:15:49
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