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lcl602169289金虫 (小有名气)
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| 求一道简答题的答案，非生命科学专业小白求大侠赐教，不胜感激。题目如下：在实验中我们发现药物处理后的 TNF 受体相关因子6 (TRAF6)蛋白的表达明显减少，通过TargetScan 靶基因预测网站发现miR-146a 或miR-30b 可能作用于TRAF6 的mRNA。请问：如何用实验证实miR-146a 或miR-30b 谁作用于TRAF6 的mRNA。 |
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jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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【答案】应助回帖
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lcl602169289: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 泪流满面，感谢大侠出手相助！ 2015-01-04 10:27:39
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| 分3组：普通细胞，转染miR-146a（或表达miR-146a的质粒）的细胞，转染miR-30b（或表达miR-30b的质粒）的细胞。用特定药物诱导TRAF6表达。一定时间后（比如1 h、2 h、6 h、12 h、24 h）收集细胞RNA样品和蛋白质样品，用RT-qPCR检测TRAF6的mRNA水平，用WB检测TRAF6的蛋白质水平。因为miR的作用是减少目的mRNA，所以当某样品中TRAF6的mRNA或蛋白质水平减少或增加，判断出哪个miR起作用。（miR直接作用于TRAF6的结果是使其mRNA减少；如果TRAF6反而增加，可能是miR作用于TRAF6的负调控基因） |
2楼2015-01-04 09:15:49