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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 小白求助纯化酶经验
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匿名

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31楼2015-01-04 00:37:14
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冼亮淀粉酶

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31楼: Originally posted by xcs100 at 2015-01-04 00:37:14
哦哦哦。DEAE 和 Q 原来是这个道理啊。
您别奇怪，菌株是一直定着的，用于其它用途，同时呢，又要研究一下它所产酶的酶学性质，所以就得纯化。
嗯，您说得对，新菌株所产酶差异一般还是比较大的。也得有个探索， ...

这个菌株会产胞外的脂肪酶吗，为什么要做胞内的？
不管是不是新菌株，所产的酶的酶学性质都是很难说是不是跟已有报道的一样的，不能肯定其纯化流程是怎样的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
32楼2015-01-04 01:03:43
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匿名

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33楼2015-01-04 01:17:58
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冼亮淀粉酶

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33楼: Originally posted by xcs100 at 2015-01-04 01:17:58
基本上只产胞内酶。好的，先借鉴经验缩小一下预方案的范围，不然瞎整、各种条件全都摸也不是个事儿。唉，首先本来就是个小白，还有就是客观条件也有点不是特别在行这方面，幸好还有你们这些人不断指点，（只是不知 ...

预装柱最好是和纯化仪配套使用，你说的柱子是空柱？我们实验室已经有了，我没买过，你得自己查。你当初怎么确定它只产胞内酶的？胞内酶的话，纯化起来跟胞外酶差不多的，就是最初的产量和破碎方面我不了解。金币方面我不缺，你得问版主是不是发帖的时候还要注意设置什么的。
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34楼2015-01-04 01:34:25
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匿名

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35楼2015-01-04 01:41:24
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冼亮淀粉酶

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35楼: Originally posted by xcs100 at 2015-01-04 01:41:24
嗯 好的。我这几天查了，纯化仪器（国产）的信息，明天元旦回来应该上班了，电话问一下。我要想买的柱子是空柱子。哦，我看的文献胞内酶纯化好像麻烦多一下，比如遇到膜蛋白了就。。。
要学的东西还很多，谢谢你们 ...

AKTA的纯化仪印象中最少的都应该要20万了，还得过海关，和预装柱配套使用的，得卖预装柱，可能赶不及。
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36楼2015-01-04 01:47:17
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37楼2015-01-04 01:52:27
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伯信生物-Sam

新虫 (初入文坛)
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38楼2015-06-25 22:13:04
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圆圈爱圈圆

银虫 (职业作家)
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13楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-12-31 00:58:31
蛋白质纯化实验方案与应用

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126&fpage=1&target=blank

此书卤煮可以参考。

现在看不到这个链接了，可以麻烦私给一个链接么
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老师让我用小木虫看文献，而我却来看段子
39楼2017-06-30 10:30:01
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
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传统方法比较粗，纯化后仍然有杂组分，而且收率低。是要用分离介质来分离的。建议你其实可以多买些填料，量大了还便宜，你100ml就700多是贵了些。DEAE FF一升才2000多，方便你后面你的中式和放大。另外填料装柱后用完可以再生重复使用的，卖家说明书里面有详细的再生方法。离子交换和疏水一个是根据组分电荷差异特点来分离，一个是根据组分的疏水差异来分离。要注意的是缓冲液的pH要适宜酶活性，要在填料的pH范围，还有就是盐浓度的选择。要得到较好的分离效果，这两个的选择是需要实验摸索的，每个样品情况都不相同，但缓冲液的类型基本类似。装柱不要产生气泡，缓冲液和样品都做脱气处理，充分平衡柱子，充分洗杂，梯度洗脱，柱子再生，这些是基本的。
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40楼2017-08-02 11:02:07
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