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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 小白求助纯化酶经验
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匿名

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11楼2014-12-31 00:41:59
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凌波丽

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11楼: Originally posted by xcs100 at 2014-12-31 00:41:59
嗯 好的，您太客气了！我下一步准备用疏水层析、离子交换层析,凝胶过滤的步骤进行。不知道这个方法上有没有顺序的颠倒。...

疏水层析、离子交换层析两者无所谓先后顺序，分子筛层析（凝胶过滤）一般在两者后面，因为分子筛上样量小，而且处理后会稀释样品。

我的那个说明应该贴出一些实例分析，我曾经手写了一份超过150+个问题的蛋白质的层析的实例分析材料作为个人备忘录，暑假时我在回国，应该可以整理成电子版贴上来以供参考和交流。
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12楼2014-12-31 00:53:34
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凌波丽

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蛋白质纯化实验方案与应用

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126&fpage=1&target=blank

此书卤煮可以参考。
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13楼2014-12-31 00:58:31
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冼亮淀粉酶

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xcs100: 金币+1 2014-12-31 11:14:07
野生菌产的酶是什么意思？重组酶还是野生酶？
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14楼2014-12-31 07:18:07
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阿Q~~

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xcs100: 金币+2, 感谢！还有花。。。 2014-12-31 11:16:21
帮顶一下，不懂! ~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
15楼2014-12-31 07:41:08
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匿名

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16楼2014-12-31 11:14:02
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匿名

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17楼2014-12-31 11:15:36
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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17楼: Originally posted by xcs100 at 2014-12-31 11:15:36
就是自然界筛选出来的，没有其它改变遗传手段处理，直接用于产目的酶...

还是没有明白，我见到的分类是野生酶和重组酶。

野生酶是指未经过遗传改造的，比如说我筛选得到一个菌株可以产淀粉酶，我就培养这个菌得到发酵液，发酵液中经过检测含有淀粉酶活力，但是我：1、不知道淀粉酶的基因序列；2、淀粉酶是从原始菌株中得到的，非其它宿主。

重组酶是指：
1、我知道了这个基因编码具有这个功能的酶；
2、我获得了这个基因；
3、我对这个基因进行遗传操作，将这个基因克隆到某个载体上，是为重组；
4、将载体导入某个宿主（原始菌或非原始菌）中进行了该菌株的基因重组；
5、获得了该基因的表达产物。

你是哪个情况？
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18楼2014-12-31 21:48:15
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匿名

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19楼2014-12-31 21:56:18
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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原来如此

一般来说，野生酶的纯化比重组酶难，从你主楼说的来看，你能不能说说你们实验室现有的软件和硬件。
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20楼2014-12-31 22:15:40
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