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wszjll

木虫 (正式写手)

[求助] 转染求助

我从公司购买了一个过表达的质粒载体，这个载体的ORF对应的是某一个膜受体。我是想通过共聚焦显微镜看这个过表达的受体位置是否会在膜上和胞浆中发生位置变换，现在有很多问题不懂，想请教各位大侠指点一二。质粒载体如附件所述，这个质粒貌似没有限制酶切位点，不知能不能做稳定转染？如果不能做稳定转染只做瞬转能满足我的要求吗？还有就是这个质粒如果不整合到染色体中，它在细胞中能表达吗？表达所需要的酶啊，底物啊等等从哪里来的？新手，别取笑哦！感谢！
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  • 附件 1 : pReceiver-M98质粒图谱.pdf
    • 2014-12-27 17:07:13, 77.84 K

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1楼 2014-12-27 17:21:39
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wszjll: 金币+25, ★★★很有帮助, 问题解释很清楚，对我帮助很大，万分感谢 2014-12-30 09:16:23
1.瞬转应该可以满足实验
2.一定要stable line的话，可以在你的ORF, neomycin之外找个酶切位点将质粒线性化，然后转进细胞，用G418筛选。不过我直接转质粒进去也做过stable line，也可以不用线性化。
3.不整合进基因组也是可以表达的，就是正常的转录和翻译。
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2楼2014-12-27 21:18:54
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wszjll

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuzhu598 at 2014-12-27 21:18:54
1.瞬转应该可以满足实验
2.一定要stable line的话，可以在你的ORF, neomycin之外找个酶切位点将质粒线性化，然后转进细胞，用G418筛选。不过我直接转质粒进去也做过stable line，也可以不用线性化。
3.不整合进基 ...

谢谢
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3楼2014-12-27 22:07:22
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