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tt2019jy

木虫 (正式写手)

[求助] 羟基胶乳微球偶联抗体 EDC 已有1人参与

各位大侠,我做这个反应已经半个月了,到现在还是一无所获。请知道的了解的大侠给点意见吧,我做的反应是这样的过程:
1 微球在MES缓冲液中(PH6.1)与EDC和sulfo-NHS室温震荡15mins;(看了很多资料和帖子,想提一个问题,到底是由沉淀的反应好还是没有沉淀产生的反应好?谢谢了)
2 收集1反应生成的微球与抗体在室温反应2小时,淬灭,洗涤,悬浮;(我查了文献只看见EDC和sulfo-NHS活化羧基的,EDC和sulfo-NHS能不能活化羟基?反应2能不能发生?谢谢)
3 取2悬浮液进行分析,发现悬浮液与血清和水均有反应度。(这种情况是怎么回事?请知道的同行指点指点吧,谢谢了)
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羧基活化EDC|DCC,NHS

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TT
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)

关于(1),有轻微沉淀,属正常现象,但没有最好。
关于(2),偶联反应可以发生,但需要调节好EDC/NHS的量,使羧基充分活化。
关于(3),还有多多余的抗体没有偶联上去,属于正常现象。只要摸索好偶联上去的量就可以了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2015-09-17 17:28:09
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scqing

捐助贵宾 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tt2019jy: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-06 10:49:57
EDC活化羧基的多,活化羟基的还真没见过,但现在又一步法可以做,直接可以偶联抗体。而且活性在有机相中很稳定。
2楼2015-01-06 10:08:37
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tt2019jy

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by scqing at 2015-01-06 10:08:37
EDC活化羧基的多,活化羟基的还真没见过,但现在又一步法可以做,直接可以偶联抗体。而且活性在有机相中很稳定。

前辈有没有相关文献,如果不涉及泄密的话就请给我一篇吧,谢谢了!jx05jxt@126.com,不管是一步法两步法,我现在就是希望能看到产品。自己做出来的产品不是没有反应度就是和水与血清都有反应度,痛苦啊!再次感谢!
TT
3楼2015-01-15 15:43:53
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doveyido

新虫 (初入文坛)

EDC可能不能活化羟基吧 与抗体偶联之后可以离心 测测上清的蛋白浓度 看看是否有偶联上去
4楼2015-01-30 16:41:39
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