| 查看: 508 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
急PCR，多次P不出，别人建议用两步PCR法，急求原理！！！！！！！！！
|
|||
|
急PCR，多次P不出，别人建议用两步PCR法，先用低退火温度做10cycle，再用高退火温度20cycle，为什么这样做？急求原理？？？？？？？？？？？不胜感激 [search]PCR[/search] |
回复此楼» 猜你喜欢
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有33人回复
-
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有14人回复
-
求助一下有机合成大神
已经有3人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
2楼2008-05-23 18:08:39
我理解你的心情
★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵，无私分享，值得鼓励。谢谢
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵，无私分享，值得鼓励。谢谢
|
当时我是新手时也一样，有些就是P不出来，后来问了问高人加上自已的TRY,现在也算有些经验 了， 当你从CDNA LIBRARY 扩增目的片段时，小于2KB还行，大的话是不容易，因为是从上万个TRANSCRIPTS 里扩一个。这时侯两步法会解决不少问题，我的几个基因就是用它搞定的。 原理是 比如PRIMER ANNEALING TEMP 是60 通常我们是用低于5度，而这时可以先用低于8到10度（50-52OC)，10 个CYCLE，目 的是先来一部分初筛,降低标准尽可能找到一些TARGETS. 后边的20 个CYCLE 再升至55,就是说用上十个CYCLE 中的产物来扩，产物跑胶后会看到目的片段的，实在不行也只好让老板多花的银子买CDNA 了。GOOD LUCK. |
3楼2008-05-24 06:22:05
4楼2008-05-27 09:43:39