| 查看: 590 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
急PCR，多次P不出，别人建议用两步PCR法，急求原理！！！！！！！！！
|
|||
|
急PCR，多次P不出，别人建议用两步PCR法，先用低退火温度做10cycle，再用高退火温度20cycle，为什么这样做？急求原理？？？？？？？？？？？不胜感激 [search]PCR[/search] |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有11人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有13人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有11人回复
2楼2008-05-23 18:08:39
我理解你的心情
★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵，无私分享，值得鼓励。谢谢
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵，无私分享，值得鼓励。谢谢
|
当时我是新手时也一样，有些就是P不出来，后来问了问高人加上自已的TRY,现在也算有些经验 了， 当你从CDNA LIBRARY 扩增目的片段时，小于2KB还行，大的话是不容易，因为是从上万个TRANSCRIPTS 里扩一个。这时侯两步法会解决不少问题，我的几个基因就是用它搞定的。 原理是 比如PRIMER ANNEALING TEMP 是60 通常我们是用低于5度，而这时可以先用低于8到10度（50-52OC)，10 个CYCLE，目 的是先来一部分初筛,降低标准尽可能找到一些TARGETS. 后边的20 个CYCLE 再升至55,就是说用上十个CYCLE 中的产物来扩，产物跑胶后会看到目的片段的，实在不行也只好让老板多花的银子买CDNA 了。GOOD LUCK. |
3楼2008-05-24 06:22:05
4楼2008-05-27 09:43:39
