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duranran

银虫 (小有名气)

[求助] 跪求各路大神,如何用平板计数法计算抗菌率? 已有3人参与

用平板计数法来检测纳米材料的抗菌性能,0.5ml菌液置于装有50ml生理盐水的三角瓶,并将纳米材料放入三角瓶中,振荡摇床培养箱中培养一段时间,再稀释一定梯度后进行涂板,计数。同一梯度的菌落数差别也比较大,不同梯度的有的还没太大的差别,最后计算抗菌率的时候该如何算啊,做了好多次杀菌测试了,求抗菌率还是不怎么明白,纠结好久了,跪求各位大神们指点!
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心若在,梦就在
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dabizi_911

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
duranran: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-12-18 21:34:14
平板计数法其实如果做得好,是一种比较准确的方法,但是工作量比较大,如果你想要获得重复效果好的数据,实验上的细节一定要注意,由于lz不是学微生物出身的,所以我这里讲的细致一点,希望有所帮助
你提到的实验过程如下:用平板计数法来检测纳米材料的抗菌性能,0.5ml菌液置于装有50ml生理盐水的三角瓶,并将纳米材料放入三角瓶中,振荡摇床培养箱中培养一段时间,再稀释一定梯度后进行涂板,计数。

根据你的实验步骤,大体上是比较规范的,所以这里我就细化一下,希望有所帮助
1.过夜培养的新鲜菌液去0.5ml接种于50ml生理盐水的三角瓶中。

2.在三角瓶中加入抗菌纳米材料,建议设置3个浓度(高/中/低)(因为你实验结果不稳定可能是因为你的材料浓度过低,抑菌效果不好。同时还应该设置一个不材料的三角瓶,作为没有处理的细菌对照,这个可以用来排出一些实验中的误差。)

3.并将纳米材料放入三角瓶中,振荡摇床培养箱中培养一段时间。(如果你是用无菌生理盐水,建议不用进行振荡摇床培养,震荡培养是为了给微生物提供足够氧气进行代谢活动,你这里没有给它们营养,所以没有必要震荡。在你将材料加入后开始计时,取0h,2h,4h,8h时间点,每个时间点去1ml样品出来进行稀释计数。)

4.在进行稀释计数的时候,一般我是10倍稀释,取100微升原液加入到900微升的无菌水中,吸打3次,得倒10倍稀释的菌液,换枪头,取100微升10被稀释的样品加入到900微升的无菌水,得倒100倍稀释的菌液,这样稀释大约3-5轮,然后每个稀释度取100微升涂布平板,每个稀释度做3个重覆。然后将涂布后的平板在培养箱中培养12-18小时,进行计数,取每个平板上菌落数在30-300之间的平板进行数据获取,因为只有这个区段是比较准确的。

在进行第4步骤是工作量比较大,但是由于lz实验一直结果不稳定,所以不妨认真试一下,通过细致的实验和重复,取得理想的实验结果

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10楼2014-12-18 14:35:32
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普通回帖

duranran

银虫 (小有名气)

有木有人啊?求赐教!!!
心若在,梦就在
2楼2014-12-15 16:36:50
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3楼2014-12-16 09:02:19
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duranran

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋千坠 at 2014-12-16 09:02:19

木人理我,金币还能收回来么?
心若在,梦就在
4楼2014-12-16 10:42:15
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ltlipc

铁杆木虫 (著名写手)

资深木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
duranran: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-16 21:04:26
同一梯度的菌落数差别也比较大,不同梯度的有的还没太大的差别,最后计算抗菌率的时候该如何算啊,做了好多次杀菌测试了,

这说明你实验方法有问题,如果同一梯度你无法降低误差率,那就无法准确计算杀菌率。
平板法比较费劲,建议使用MIC实验和药敏片法,这样操作比较简单
功能是流动的形态,形态是凝固的功能。
5楼2014-12-16 11:31:59
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duranran

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ltlipc at 2014-12-16 11:31:59
同一梯度的菌落数差别也比较大,不同梯度的有的还没太大的差别,最后计算抗菌率的时候该如何算啊,做了好多次杀菌测试了,

这说明你实验方法有问题,如果同一梯度你无法降低误差率,那就无法准确计算杀菌率。
平 ...

嗯,平板法确实是很费劲,我去问过老师,他说这种方法没有问题,我是学化学的,其他的方法也不怎么明白呐!
心若在,梦就在
6楼2014-12-16 16:49:30
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zongming

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
duranran: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-16 21:04:05
将某一合适浓度细菌的PBS 溶液梯度稀释并用涂布培养法检测在试样表面培养12 h 后仍存活的细菌数,并用如下公式计算试样的抗菌率R:R = (B – A) / B × 100% A 为各组式样表面的活细菌数,B 为对照组即Ti表面的活细菌数。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2014-12-16 17:16:35
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duranran

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zongming at 2014-12-16 17:16:35
将某一合适浓度细菌的PBS 溶液梯度稀释并用涂布培养法检测在试样表面培养12 h 后仍存活的细菌数,并用如下公式计算试样的抗菌率R:R = (B – A) / B × 100% A 为各组式样表面的活细菌数,B 为对照组即Ti表面的活细 ...

我就是要这么算的,只是有时A,B活细菌数差不多,有时数量很多,有时又很少,没有什么规律呐,不知道怎么回事!
心若在,梦就在
8楼2014-12-16 21:03:40
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duranran

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋千坠 at 2014-12-16 09:02:19

9楼2014-12-16 21:05:16
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