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duranran

银虫 (小有名气)

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[求助] 跪求各路大神，如何用平板计数法计算抗菌率？已有3人参与

用平板计数法来检测纳米材料的抗菌性能，0.5ml菌液置于装有50ml生理盐水的三角瓶，并将纳米材料放入三角瓶中，振荡摇床培养箱中培养一段时间，再稀释一定梯度后进行涂板，计数。同一梯度的菌落数差别也比较大，不同梯度的有的还没太大的差别，最后计算抗菌率的时候该如何算啊，做了好多次杀菌测试了，求抗菌率还是不怎么明白，纠结好久了，跪求各位大神们指点！

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心若在，梦就在

1楼2014-12-15 11:18:06

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dabizi_911

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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duranran: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-12-18 21:34:14

平板计数法其实如果做得好，是一种比较准确的方法，但是工作量比较大，如果你想要获得重复效果好的数据，实验上的细节一定要注意，由于lz不是学微生物出身的，所以我这里讲的细致一点，希望有所帮助
你提到的实验过程如下：用平板计数法来检测纳米材料的抗菌性能，0.5ml菌液置于装有50ml生理盐水的三角瓶，并将纳米材料放入三角瓶中，振荡摇床培养箱中培养一段时间，再稀释一定梯度后进行涂板，计数。

根据你的实验步骤，大体上是比较规范的，所以这里我就细化一下，希望有所帮助
1.过夜培养的新鲜菌液去0.5ml接种于50ml生理盐水的三角瓶中。

2.在三角瓶中加入抗菌纳米材料，建议设置3个浓度（高/中/低）（因为你实验结果不稳定可能是因为你的材料浓度过低，抑菌效果不好。同时还应该设置一个不材料的三角瓶，作为没有处理的细菌对照，这个可以用来排出一些实验中的误差。）

3.并将纳米材料放入三角瓶中，振荡摇床培养箱中培养一段时间。（如果你是用无菌生理盐水，建议不用进行振荡摇床培养，震荡培养是为了给微生物提供足够氧气进行代谢活动，你这里没有给它们营养，所以没有必要震荡。在你将材料加入后开始计时，取0h,2h,4h,8h时间点，每个时间点去1ml样品出来进行稀释计数。）

4.在进行稀释计数的时候，一般我是10倍稀释，取100微升原液加入到900微升的无菌水中，吸打3次，得倒10倍稀释的菌液，换枪头，取100微升10被稀释的样品加入到900微升的无菌水，得倒100倍稀释的菌液，这样稀释大约3-5轮，然后每个稀释度取100微升涂布平板，每个稀释度做3个重覆。然后将涂布后的平板在培养箱中培养12-18小时，进行计数，取每个平板上菌落数在30-300之间的平板进行数据获取，因为只有这个区段是比较准确的。

在进行第4步骤是工作量比较大，但是由于lz实验一直结果不稳定，所以不妨认真试一下，通过细致的实验和重复，取得理想的实验结果