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season0906

铁虫 (初入文坛)

[求助] HIF蛋白提取 已有2人参与

我的实验需要提取细胞中的蛋白,做HIF的western检测,但是听说这个缺氧诱导因子有一些特殊要求,容易遇氧降解,请问下有没有前辈做过呢,能不能给指点一下?
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wanghm200810

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

快速提蛋白,裂解液里加如还原剂DTT,加蛋白酶抑制剂,应该可以很好的解决这个问题,主要还得快,美国有一种柱式法蛋白提取方法,1分钟可以完成蛋白提取,你可以搜一下。
Changeyoursciencespeed!
6楼2018-04-19 16:51:13
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-16 11:33:17
蛋白降解不是氧能决定的,真正降解它的应该是蛋白酶,氧只不过是个引子,加蛋白酶抑制剂提取蛋白即可。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
2楼2014-12-16 11:05:29
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巧笑倩兮12

铁虫 (初入文坛)

你好,我想咨询下HIF遇氧就降解的问题,最终你是怎么解决的,可否告知?谢谢!
愿做一只自由翱翔的飞鹰!
3楼2015-06-04 09:03:36
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巧笑倩兮12

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biotech_zhou at 2014-12-16 11:05:29
蛋白降解不是氧能决定的,真正降解它的应该是蛋白酶,氧只不过是个引子,加蛋白酶抑制剂提取蛋白即可。

加常用的PMSF蛋白酶抑制剂效果不大呢?
愿做一只自由翱翔的飞鹰!
4楼2015-06-04 09:05:41
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