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lybio金虫 (正式写手)
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连接体系中啥出问题了？
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10ul连接体系： 载体 2.7ul（约50ng）先平端酶切，胶回收。后CIAP，用酚抽提，醇沉淀。 用灭菌，经55度预热的ddW溶解。 DNA片断 2.7ul（约100ng） 用pfu酶进行PCR（PCR产物是平端的）， 胶回收。与载体摩尔比约10:1 PEG8000 3.7ul（终浓度为15％） T4连接酶 buffer 1ul T4连接酶（宝生物） 1ul 16度反应16h，也试过用16度，22度，4度的不同温度循环反应。但就一直没连上，转化的大肠杆菌一个都没长，到底是哪出了问题？谢谢指教！ [ Last edited by lybio on 2008-5-22 at 19:47 ] |
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