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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半定量RT-RNA中怎么克隆内参基因18S rRNA
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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 半定量RT-RNA中怎么克隆内参基因18S rRNA

最近要做半定量RT-PCR，研究在mRNA水平上一个耐盐基因的表达特异性。我在NCBI上查到该物种的18s rRNA基因序列，所以我想用18s rRNA为内参基因。
我想问的是18s rRNA是核糖体RNA，没有ployA尾巴，怎么能够反转录成cDNA作为扩增18s rRNA的模板？
另外，在NCBI上查到的该物种的18s rRNA基因序列有标明引物序列，那是不是这对引物序列就是外显子序列的一部分，能直接用这对引物以cDNA为模板扩增出18s rRNA？
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1楼 2014-12-08 09:59:38
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青青雨季

新虫 (初入文坛)
同学，我想知道你的问题解决了没？我现在也遇到了同样的问题，想用18S做内参，但不知道反转录时用什么引物。
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2楼2015-01-08 20:13:02
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 青青雨季 at 2015-01-08 20:13:02
同学，我想知道你的问题解决了没？我现在也遇到了同样的问题，想用18S做内参，但不知道反转录时用什么引物。

解决了。我是在NCBI上搜索到实验物种的18S基因序列，在ORF区设计的引物，从通过反转录得到的cDNA上扩增出来的。
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3楼2015-01-22 15:12:44
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