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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)

[交流] 凝胶色谱柱保留时间漂移

本人一直使用凝胶色谱柱分析蛋白质,最近发现同一样品的保留时间延后6、7分钟出峰,不知是啥问题?希望能得到各位的帮助。
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l379989165

金虫 (正式写手)

水晶

★ ★
dnp(金币+2,VIP+0):谢谢应助……^_^
出峰保留时间前移和后移,这现象很正常。室温有时候都有一定的影响。只要在漂移范围之内,结果误差可忽略不计,不影响分析的。
例如气相,出峰位置延后,原因有以下几种可能性:1、载气流速发生变化;2、色谱柱的温度变化;3、样品预处理浓度不一样;4、柱子连接管路有泄露或堵塞;5、柱子被污染了,需要清洗。
来是偶然,去是必然,尽其当然,顺其自然。得之淡然,失之泰然,争其必然,自然而然。
4楼2008-05-21 15:32:38
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we-july

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
dnp(金币+3,VIP+0):谢谢应助……^_^
凝胶色谱柱测蛋白的分子量,一般都用盐溶液或者乙腈水的三氟乙酸溶液作流动相。
出峰时间延迟,我觉得有这么几个可能:
1对应成分分子量变化--比如水解等;看看你的标准品变化了没有,出峰时间是否异常。
2如果分离机理不光是分子筛原理,还有一些流动相极性分离的因素,那么流动相极性变化也能导致出峰时间变化。这方面可能性比较大。
3 柱子出问题了。不过一般柱效降低分离度上可以看出来。
2楼2008-05-20 15:51:09
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419649551

★ ★
dnp(金币+2,VIP+0):谢谢应助……
1. 温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定

2. 流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

3. 柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡
3楼2008-05-21 13:04:25
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)

确定样品、色谱柱都是正常;流动相未改变;平衡柱子的时间够长。通过改变温度,发现温度对保留时间影响很大。
5楼2008-06-13 12:25:30
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