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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 凝胶色谱柱保留时间漂移
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)

[交流] 凝胶色谱柱保留时间漂移

本人一直使用凝胶色谱柱分析蛋白质,最近发现同一样品的保留时间延后6、7分钟出峰，不知是啥问题？希望能得到各位的帮助。
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1楼 2008-05-20 15:04:27
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419649551

★ ★
dnp(金币+2,VIP+0):谢谢应助……
1． 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

2． 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

3． 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
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3楼2008-05-21 13:04:25
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we-july

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
dnp(金币+3,VIP+0):谢谢应助……^_^
凝胶色谱柱测蛋白的分子量，一般都用盐溶液或者乙腈水的三氟乙酸溶液作流动相。
出峰时间延迟，我觉得有这么几个可能：
1对应成分分子量变化－－比如水解等；看看你的标准品变化了没有，出峰时间是否异常。
2如果分离机理不光是分子筛原理，还有一些流动相极性分离的因素，那么流动相极性变化也能导致出峰时间变化。这方面可能性比较大。
3 柱子出问题了。不过一般柱效降低分离度上可以看出来。
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2楼2008-05-20 15:51:09
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l379989165

金虫 (正式写手)

水晶
★ ★
dnp(金币+2,VIP+0):谢谢应助……^_^
出峰保留时间前移和后移，这现象很正常。室温有时候都有一定的影响。只要在漂移范围之内，结果误差可忽略不计，不影响分析的。
例如气相，出峰位置延后，原因有以下几种可能性：1、载气流速发生变化；2、色谱柱的温度变化；3、样品预处理浓度不一样；4、柱子连接管路有泄露或堵塞；5、柱子被污染了，需要清洗。
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来是偶然，去是必然，尽其当然，顺其自然。得之淡然，失之泰然，争其必然，自然而然。
4楼2008-05-21 15:32:38
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)
确定样品、色谱柱都是正常；流动相未改变；平衡柱子的时间够长。通过改变温度，发现温度对保留时间影响很大。
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5楼2008-06-13 12:25:30
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