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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出来老是一条线，没有条带（mark也跑不出来）
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ben_moody

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶没形成好，没形成网络结构，拦不住分子

[ 发自小木虫客户端 ]
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和光同尘
11楼2014-12-05 14:54:56
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xuyun618

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
12楼2014-12-05 18:06:46
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任飞芸

木虫 (正式写手)
marker 都没出应该是试剂问题吧！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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比较神经质的自己
13楼2014-12-05 18:44:49
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韩国斌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本人觉得是染色液的问题，你把染色液重新配了试试。还有就是你的胶感觉也有问题，最好等两层胶都凝聚好了之后再上样。
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14楼2014-12-05 19:06:42
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zoe回望: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-09 21:58:02
本帖内容被屏蔽
15楼2014-12-05 22:16:58
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zoe回望

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2014-12-05 13:31:41
缓冲液和sds配好了放四度一年没什么问题，10%ap -20度一个月没问题。丙烯酰胺溶液用过4个月的没问题。胶不凝，一般就是ap 或者temed 的问题
你的胶上marker都看不到，是你没有放还是没跑出来。如果没跑出来，你的 ...

mark是没有跑出来。我感觉mark没跑出来就是它在告诉我胶有问题，但是我不知道是哪个药品有问题，还是是我全部重新配，至于配方这个，我就拍换了就不凝，你不知道，之前就是不凝，找了一个多星期才发现是AP的问题，药本身就有问题。sds，我每次配10ml分2ml管子都冻冰箱，4度（会有那种白色的物质，解冻完就没了，因为之前不放冰箱的，后来发现自己也白了而且分层了，就丢了），每次用解冻。会是这个问题不？
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16楼2014-12-05 23:16:49
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zoe回望

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yaomengche at 2014-12-05 14:50:49
觉得是不是pH的问题，样品酸碱异常！

但是mark也没跑出来。请问一般样品多少pH合适，每次提完之后都要测这个吗？
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17楼2014-12-05 23:19:16
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zoe回望

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xuyun618 at 2014-12-05 18:06:46
我们实验室一般配下层是把30%丙烯酰胺，ph8.8，10%ap，10%sds，temed直接混到一起，不需要你中间的抽气，temed是直接买的宝成的，也不是你说的10%,混一起加上就可以用水封或者用异丙醇封就行了，上层就换成ph6.6配， ...

我的也是30%，pH8.9，浓缩胶是pH6.8的，药品的厂家我没注意，我明天看看去，谢谢~
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18楼2014-12-05 23:27:52
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by zoe回望 at 2014-12-05 23:16:49
mark是没有跑出来。我感觉mark没跑出来就是它在告诉我胶有问题，但是我不知道是哪个药品有问题，还是是我全部重新配，至于配方这个，我就拍换了就不凝，你不知道，之前就是不凝，找了一个多星期才发现是AP的问题， ...

凝不凝，主要看ap和temed，你为什么要怕呢？你的目的也是解决问题。如果是10%的sds，温度低的话会分层的，我们实验室一般都是差不大20度以上，10%的sds 没有分过层，每次解冻对我来说没有问题。至于哪个药品有问题你只能自己查了，因为你的marker 都跑不出来，试剂肯定是有问题的
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19楼2014-12-06 00:13:38
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283503264

银虫 (小有名气)
是不是槽子有问题
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Action is the food and drink which will nourish my success.
20楼2014-12-06 14:02:19
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