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两重PCR程序求求求设计。 已有1人参与
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引物1 F:AGCAGGTTATAAGCTAGGCC Tm:60.0 R:CTACCAACAAGTTCATCAAA Tm:54.0 引物2 F:GAACAATGCCCAAACTTGAGA Tm:53.9 R:GGGTCCACATGTCAGTGAGC Tm:64.0 参考文献的程序：95℃ 3min 引物1用量 0.8微升 94℃ 1min 引物2用量 1.2微升 55℃ 1min 72℃ 1min 6个循环 94℃ 1min 55℃ 50S 72℃ 30S 32个循环 72℃ 6min 图片程序如下：酶是天根2×PCR Mix，用量10ul，模板100ng， 引物1用量 0.5微升，引物2用量 0.5微升，20ul体系 95℃ 3min 94℃ 1min 58℃ 30S 72℃ 30S 12个循环 94℃ 1min 55℃ 30S 72℃ 1min 31个循环 72℃ 6min 试了很多程序，怎么跑都有二聚体；要么就片段1扩增不理想。求大神帮帮忙。  001.jpg |
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2楼2014-12-04 17:35:51