24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3115)
>虫友互识 (237)
>文献求助 (175)
>导师招生 (74)
>考博 (50)
>休闲灌水 (50)
>招聘信息布告栏 (44)
>博后之家 (34)
>硕博家园 (24)
>晶体 (19)
>论文投稿 (19)
>论文道贺祈福 (16)
>考研 (16)
>教师之家 (14)
>公派出国 (14)
>有机资源 (10)

返回列表

美丽坏东西

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 806.3
帖子: 47
在线: 146.4小时
虫号: 2504334
注册: 2013-06-11
专业: 蛋白质组学

[求助] 两重PCR程序求求求设计。已有1人参与

引物1 F:AGCAGGTTATAAGCTAGGCC    Tm:60.0
         R:CTACCAACAAGTTCATCAAA    Tm:54.0

引物2 F:GAACAATGCCCAAACTTGAGA Tm:53.9
         R:GGGTCCACATGTCAGTGAGC    Tm:64.0

参考文献的程序：95℃  3min          引物1用量 0.8微升
                        94℃  1min          引物2用量 1.2微升
                        55℃  1min
                        72℃  1min
                        6个循环
                        94℃  1min
                        55℃  50S
                        72℃  30S
                           32个循环
                        72℃  6min

图片程序如下：酶是天根2×PCR Mix，用量10ul，模板100ng，引物1用量 0.5微升，引物2用量 0.5微升，20ul体系
                        95℃  3min
                        94℃  1min
                        58℃  30S
                        72℃  30S
                        12个循环
                        94℃  1min
                        55℃  30S
                        72℃  1min
                        31个循环
                        72℃  6min
试了很多程序，怎么跑都有二聚体；要么就片段1扩增不理想。求大神帮帮忙。

001.jpg

回复此楼