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美丽坏东西

新虫 (初入文坛)

[求助] 两重PCR程序求求求设计。 已有1人参与

引物1   F:AGCAGGTTATAAGCTAGGCC      Tm:60.0
            R:CTACCAACAAGTTCATCAAA      Tm:54.0

引物2   F:GAACAATGCCCAAACTTGAGA    Tm:53.9
            R:GGGTCCACATGTCAGTGAGC     Tm:64.0

参考文献的程序：95℃  3min             引物1用量 0.8微升            
                            94℃  1min             引物2用量 1.2微升
                            55℃  1min
                            72℃  1min
                           6个循环
                            94℃  1min
                            55℃  50S
                            72℃  30S
                             32个循环
                            72℃  6min

图片程序如下：酶是天根2×PCR Mix，用量10ul，模板100ng， 引物1用量 0.5微升，引物2用量 0.5微升，20ul体系
                            95℃  3min                        
                            94℃  1min            
                            58℃  30S
                            72℃  30S
                           12个循环
                            94℃  1min
                            55℃  30S
                            72℃  1min
                            31个循环
                            72℃  6min
试了很多程序，怎么跑都有二聚体；要么就片段1扩增不理想。求大神帮帮忙。

两重PCR程序求求求设计。
001.jpg
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1楼 2014-12-04 16:03:37
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山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
美丽坏东西(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:52:58
双重PCR有引物二聚体不是太稀奇的，感觉可以提高退火温度 试试

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2楼2014-12-04 17:35:51
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