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xueyutianj新虫 (小有名气)
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退火的问题
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各位前辈好， 我现在有寡核苷酸链2A和2B，长都是26个碱基，其实2B就是包含了两段13个碱基的重复序列，每段序列命名为B，2A也一样。然后我合成了互补片段A*B*，和B*A*， 长度都是26个碱基，想通过这个互补片段把前面的2A和2B连起来，就是想要连着的AA BB AA ~~~， 用 A*B* B*A* 与之互补配对，形成双链无所谓，希望这条链越长越好，可我现在不知道怎么做退火，试了下，貌似不行。 我的方法是： 取等量的2A 2B A*B* B*A*, 就是从原液里取的（100 uM), 离心管混合后，放到沸水里加热5分钟，然后关掉电磁炉，自然冷却到室温，厂家提供的Tm是38度，室温大概15度。buffer 是10 mM 的TE，外加50mM NaCl 后来电泳结果条带位置很前，貌似是没做出来或者形成的链很短 这个退火对我下一步实验超级超级重要，大家能给我点建议吗？ |
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