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pull down 实验中蛋白聚体问题 已有2人参与
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最近在做体外pull down的过程中遇到了一些问题，想各位有经验的人请教一下，我都只是用SDS-PAGE检测了下。 1、用于pull down实验的蛋白需要考虑其聚体形式吗？我之前都是从金属离子亲和层析纯化后就直接做GST pull down，没有考察蛋白是否多聚（GST fusion的应该一般容易聚），没有做出来。是否有必要进一步明确蛋白聚体或提高buffe盐浓度之类的再试一试。 2、有人会做正反都试一下（即GST-proteinX+proteinY，proteinX+GST-proteinY），可能是因为考虑到GST对蛋白的辅助折叠功能太强，改变其实际的折叠。我不知道这么做是否有必要？ 期待大家的回复！  |
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