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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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[交流] 色谱峰总有前延，峰形不正

今天做HPLC，样品峰形不正太，起初以为是杂质，用梯度分离，不好使；后来再进一针标准品，发现标准品的峰形依然不好。开始排查原因：
1. 起初流动相加了0.8%冰醋酸，考虑是否是酸性不够，改为0.8%甲酸，峰形依然没有改变；
2. 考虑是否柱效不行，换了一根柱子；冒险把柱子反冲一次，峰形依然没有改变；
3. 进样阀用甲醇清洗，作用不大；
4. 进针色谱甲醇，用甲醇溶解的样品，看了下吸收度，认为基线基本没有变化；
5. 流动相把甲醇换成乙腈，峰形还是没有变化；
6. 把0.8%冰醋酸流动相，换成纯水峰形还是没有变化；
另外，这根柱子、色谱条件和液相一个月前测这个样品峰形还非常好，最近搬了一次校区再用就不好了，非常奇怪。
明天，把这根柱子换到另一台液相上再试试，再认真清理下进样阀，看看结果吧，实验太揪心！！！
跟大家请教下还有什么方面没有注意到，需要处理下？？？

标准品的色谱峰.jpg

色谱甲醇进样色谱峰.jpg

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1楼2014-11-26 20:33:47

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yuecen

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

31楼: Originally posted by jianqiangli at 2014-12-02 07:35:17
后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题，就把这问题忽略了。waters上做，样品必须得用流动相溶解。很奇怪。
...

找到原因了就好，呵呵，我没用过WATERS的仪器，不过溶剂效应到是遇到过几次，所以一般为了保险起见都会用流动相来溶解，除非特殊样品。有一次因为之前也是用甲醇溶解没有溶剂效应，再重复的时候就发现溶剂效应很强，峰型极差，最后发现是因为第一次试验用甲醇溶解的时候我们每次都用的混标，就是加了内标，而后来重复试验的时候没有用混标。因为内标影响了甲醇溶解样品的PH值所以峰型挺好，而未加内标的样品用甲醇溶解时就出现了很强的溶剂效应，改用流动相溶解就好了。祝好运！