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克隆基因克隆不出来，请各位老师同学看看什么问题。 已有4人参与
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各位老师好，本人今年研一，做的是同源基因克隆。师兄从NCBI查找的序列，设计了12对引物（12个功能结构域相似的基因），我用各种处理的（高温，低温，乙醇，盐）CDNA模板跑pcr，一共只有4对引物跑出了条带，但是大都与查找的序列不对应，我使用的是诺唯赞的mix酶。 回收条带后连接pud19-T载体，过夜培养后挑出单克隆，拿去测序，比对率都在25%左右。 不只是哪里出现了问题，跑PCR的时候就是按照师兄给的条件跑的：94 3min ;94 30s, 55 30s, 72 2min(30循环);4 正无穷。 第一次发帖，也没什么经验，不知道说清楚没有，金币也没多少，所以还请各位老师同学见谅，帮帮我！ |
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