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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » OD值偏高的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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疯狂的bamboo

铜虫 (小有名气)

[求助] OD值偏高的问题 已有1人参与

我是通过抗原免疫后测定血清中抗体效价问题，包被抗原5ug/ml,每孔100ul；封闭；血清采用倍比稀释，1:10,1:20……1:6400，每孔100ul；二抗结合，1:5000稀释；底物结合。最后结果对照组和实验组OD值偏高，高的达到了2.3左右，对照组OD值相对低一点，但是实验组与之相比未达到显著，求高人指点下问题出在哪了？bb不多，先谢过了！
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Life needs passion and imagination and most important , action!!!
1楼 2014-11-23 10:06:21
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疯狂的bamboo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by limichuan at 2014-11-25 08:30:02
封闭那么短肯定是不行的，就算是热封也要四个小时！

嗯 谢谢 我今天把封闭的时间延长下试试
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14楼2014-11-25 08:50:36
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
疯狂的bamboo: 金币+5, ★有帮助 2014-11-23 22:38:03
你把数据贴出来，给你分析。
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本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
2楼2014-11-23 22:21:38
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疯狂的bamboo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by limichuan at 2014-11-23 22:21:38
你把数据贴出来，给你分析。

第一行是空白对照 第二行是试验对照，下面的是实验组，麻烦帮我好好看看哈。
OD值偏高的问题
2.png
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Life needs passion and imagination and most important , action!!!
3楼2014-11-23 22:37:41
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疯狂的bamboo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by limichuan at 2014-11-23 22:21:38
你把数据贴出来，给你分析。

我是通过抑制素抗原免疫獭兔后测定抑制素（inhibin）抗体效价，下面是我的实验方案
1 用包被缓冲液将inhibin（当初注射用的抗原，inhibin完全重组蛋白）稀释至5ug/ml，每孔100ul，4℃过夜。次日洗涤三次，每次两分钟。
2 动物血清梯度稀释（1:10 1:100……1:1000000）后来改为（1:10,1:20……），每孔100ul，室温孵育1h，洗涤三次，同时做空白对照，阴性对照（就是我在实验中设的对照，未注射抗原）
3 加入新鲜稀释的酶标二抗（羊抗兔），1:5000稀释，100ul，室温孵育45min，洗涤
4 加入底物显色液TMB，新鲜配制，100ul每孔，室温15min
5 加2M 硫酸 200ul每孔，终止
6 elisa检测仪检测450nm处OD值
我原本是打算：比较实验组和阴性对照组的OD值确定阳性阴性的，但是测定的OD值（1）OD值普遍较高；（2）虽然同一稀释度下，实验组OD值高于对照组，但没有达到判定阳性的水平。可以确定的是：实验组中肯定有抑制素抗体，因为通过其他途径的激素变化已经确定了。是不是试验步骤 加量方面存在问题呀？？求指导
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Life needs passion and imagination and most important , action!!!
4楼2014-11-23 22:39:42
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