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ggyy0911铁虫 (正式写手)
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打算在N端加His标签，求个人帮着看看引物设计~急啊 已有4人参与
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因为3‘端用的NotI，保护碱基和酶切位点都太长，再加上His标签引物长度都58了，所以打算把His标签挪到5’端上去。 5‘端用EcoRI酶切位点，我的引物序列是AAG ACA TGC CCA AAG GTG AAG，21个 EcoRI用CCG作保护碱基，GAATTC酶切位点，还得再加个起始密码子ATG，然后挂His标签CATCATCACCATCACCAT 所以最后上游引物应该是5’-3’ CCGGAATTCATG CATCATCACCATCACCAT AAGACATGCCCAAAGGTGAAG=51个，所有的密码子都是正向写，不用反向互补的写。 51个啊！ 如果我把真正的引物序列减短一些呢，减到18个左右行不行。或者求大家给点建议吧。 还有N端如果加标签的话，据说会有不一定能表达完的蛋白，这样上柱子的时候，这些杂蛋白也会挂上去。但在C端就可以保证蛋白是表达完整的。 |
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