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3‘RACE电泳图跑成这样是怎么回事，求高手们指点一下，迷茫 已有1人参与
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我用的是巢式PCR法做的RACE，两次结果，产物都积在胶孔处，求教做过3’RACE的朋友们这是怎么回事呢，很迷茫，做不出来。 前4个是第三次PCR结果，后两个是第二轮PCR结果。 4)PCR反应程序如下 第一次PCR： cDNA 2 μL 10×PCR buffer 2 .5μL Ex Taq HS 0.2 μL dNTP （10 mmol·L-1） 0.3 μL GSP-F1 0.5 μL M13 Primer M4 0.5 μL 超纯H2O 18.1 μL 总体积 25 μL 反应条件为： 95℃ 5min；95℃ 30s，65℃ 30s，72℃ 1min，3 个循环；95℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 1min，3 个循环；95℃ 30s，59℃ 30s，72℃ 1min，3 个循环；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 1min，3 个循环；95℃ 30s，53℃ 30s，72℃ 1min，25 个循环；72℃延伸10min，最后4℃保存。 第二轮和第三轮PCR反应分别以上一轮PCR反应的产物为底物，未稀释，程序、体系一样。  IMG_20141120_112123.jpg |
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