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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

[求助] 噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题

最近要做噬菌体筛选，按照文献上配制了上层琼脂：
1L水中：
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
调整pH至7.0，再补足水至1L。
添加琼脂粉7g。
使用时于微波炉中融化后，保存于45℃水浴锅中待用。
我遇到的问题是：按照这个配方配制的上层琼脂在45℃保存的时候就会凝固，接下来没有办法涂板子。
水浴锅温度没有问题，我是用温度计测量的。
培养板需预热的问题我也知道，只是现在还涉及不到这个问题。
我想可能是琼脂的问题，可是我们实验室之前（3年之前）有人做过这个，也没有出现过问题啊。虽然他的琼脂和我的不是同一批次。
我试着调低琼脂的浓度至0.6%和0.5%，结果还是不好。
不知道有那位大侠知道这个问题的解决办法，请在这里帮我一把，多谢多谢！
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1楼 2014-11-20 20:13:04
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wang jian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 砰砰响 at 2017-06-30 16:00:36
我刚开始做，现在测定辅助噬菌体KM13滴度。辅助噬菌体是感染TG1（菌株无抗性）后扩增的。

取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍稀释。稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合（菌液已经增长到OD600=1），37 ...

菌液和噬菌体稀释液可多加点，我是40微升噬菌体+600微升细菌（OD600=0.6-0.9）,混匀后先37度摇床孵育10-20 min，然后加1 mL  top agar，剩下一样的操作，如果还是没有噬菌斑  可能是你的噬菌体活性太低（滴度太低），这时候可以加大噬菌体原液入量
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8楼2023-04-10 10:26:16
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
可怜一直没有人回复。不过我找到问题的根源了，原来是琼脂的问题。原来的琼脂（台龙牌）是条状的，后来换了琼脂粉（天津科密欧）就没有问题了。不知道以后还有没有人遇到和我类似的问题，如果今天我的结果能给那个人提供帮助的话，我也算做了件有意义的事情吧。
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2楼2014-11-23 19:44:44
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
可怜我这三流学校的学生，不止一次地图了便宜，败给劣质试剂。。。
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3楼2014-11-23 19:48:04
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greatfoxer

木虫 (职业作家)
谢谢楼主分享！我学到了！
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知行合一
4楼2014-11-23 20:25:26
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