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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

[求助] 噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题

最近要做噬菌体筛选,按照文献上配制了上层琼脂:
1L水中:
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
调整pH至7.0,再补足水至1L。
添加琼脂粉7g。
使用时于微波炉中融化后,保存于45℃水浴锅中待用。
我遇到的问题是:按照这个配方配制的上层琼脂在45℃保存的时候就会凝固,接下来没有办法涂板子。
水浴锅温度没有问题,我是用温度计测量的。
培养板需预热的问题我也知道,只是现在还涉及不到这个问题。
我想可能是琼脂的问题,可是我们实验室之前(3年之前)有人做过这个,也没有出现过问题啊。虽然他的琼脂和我的不是同一批次。
我试着调低琼脂的浓度至0.6%和0.5%,结果还是不好。
不知道有那位大侠知道这个问题的解决办法,请在这里帮我一把,多谢多谢!
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wang jian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 砰砰响 at 2017-06-30 16:00:36
我刚开始做,现在测定辅助噬菌体KM13滴度。辅助噬菌体是感染TG1(菌株无抗性)后扩增的。

取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍稀释。稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合(菌液已经增长到OD600=1),37 ...

菌液和噬菌体稀释液可多加点,我是40微升噬菌体+600微升细菌(OD600=0.6-0.9),混匀后先37度摇床孵育10-20 min,然后加1 mL  top agar,剩下一样的操作,如果还是没有噬菌斑  可能是你的噬菌体活性太低(滴度太低),这时候可以加大噬菌体原液入量
8楼2023-04-10 10:26:16
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

可怜一直没有人回复。不过我找到问题的根源了,原来是琼脂的问题。原来的琼脂(台龙牌)是条状的,后来换了琼脂粉(天津科密欧)就没有问题了。不知道以后还有没有人遇到和我类似的问题,如果今天我的结果能给那个人提供帮助的话,我也算做了件有意义的事情吧。
2楼2014-11-23 19:44:44
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

可怜我这三流学校的学生,不止一次地图了便宜,败给劣质试剂。。。
3楼2014-11-23 19:48:04
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greatfoxer

木虫 (职业作家)

谢谢楼主分享!我学到了!
知行合一
4楼2014-11-23 20:25:26
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