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铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

[求助] 噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题

最近要做噬菌体筛选,按照文献上配制了上层琼脂:
1L水中:
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
调整pH至7.0,再补足水至1L。
添加琼脂粉7g。
使用时于微波炉中融化后,保存于45℃水浴锅中待用。
我遇到的问题是:按照这个配方配制的上层琼脂在45℃保存的时候就会凝固,接下来没有办法涂板子。
水浴锅温度没有问题,我是用温度计测量的。
培养板需预热的问题我也知道,只是现在还涉及不到这个问题。
我想可能是琼脂的问题,可是我们实验室之前(3年之前)有人做过这个,也没有出现过问题啊。虽然他的琼脂和我的不是同一批次。
我试着调低琼脂的浓度至0.6%和0.5%,结果还是不好。
不知道有那位大侠知道这个问题的解决办法,请在这里帮我一把,多谢多谢!
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砰砰响

新虫 (初入文坛)

我刚开始做,现在测定辅助噬菌体KM13滴度。辅助噬菌体是感染TG1(菌株无抗性)后扩增的。

取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍稀释。稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合(菌液已经增长到OD600=1),37℃孵育1h,之后与4mL 0.5% Top Agar(42℃孵育的)混匀,倾注于2×YT(无抗性)平板{已经37℃预热},凝固后置于37℃恒温培养。始终没有长斑。

我我检查过平板、顶层琼脂都是新配制的。KM13是感染50mlTG1菌扩增后的,请您指导下,我都做了一星期了。现在还不知道社么原因?!!


下图是我双层琼脂法测滴度,第一张图菌么有长满,换了低熔点琼脂后生长如第二张图,图有点不太清楚,但是没有看到噬菌斑呢。
噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题
没长斑.jpg

5楼2017-06-30 16:00:36
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

可怜一直没有人回复。不过我找到问题的根源了,原来是琼脂的问题。原来的琼脂(台龙牌)是条状的,后来换了琼脂粉(天津科密欧)就没有问题了。不知道以后还有没有人遇到和我类似的问题,如果今天我的结果能给那个人提供帮助的话,我也算做了件有意义的事情吧。
2楼2014-11-23 19:44:44
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

可怜我这三流学校的学生,不止一次地图了便宜,败给劣质试剂。。。
3楼2014-11-23 19:48:04
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greatfoxer

木虫 (职业作家)

谢谢楼主分享!我学到了!
知行合一
4楼2014-11-23 20:25:26
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