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289363400铁杆木虫 (知名作家)
凌乱前进方向
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[求助]
噬菌体滴度测定之上层琼脂凝固点过低的问题
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最近要做噬菌体筛选，按照文献上配制了上层琼脂： 1L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 调整pH至7.0，再补足水至1L。 添加琼脂粉7g。 使用时于微波炉中融化后，保存于45℃水浴锅中待用。 我遇到的问题是：按照这个配方配制的上层琼脂在45℃保存的时候就会凝固，接下来没有办法涂板子。 水浴锅温度没有问题，我是用温度计测量的。 培养板需预热的问题我也知道，只是现在还涉及不到这个问题。 我想可能是琼脂的问题，可是我们实验室之前（3年之前）有人做过这个，也没有出现过问题啊。虽然他的琼脂和我的不是同一批次。 我试着调低琼脂的浓度至0.6%和0.5%，结果还是不好。 不知道有那位大侠知道这个问题的解决办法，请在这里帮我一把，多谢多谢！ |
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4楼2014-11-23 20:25:26
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2楼2014-11-23 19:44:44
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3楼2014-11-23 19:48:04
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我刚开始做，现在测定辅助噬菌体KM13滴度。辅助噬菌体是感染TG1（菌株无抗性）后扩增的。 取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍稀释。稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合（菌液已经增长到OD600=1），37℃孵育1h，之后与4mL 0.5% Top Agar（42℃孵育的）混匀，倾注于2×YT（无抗性）平板｛已经37℃预热｝，凝固后置于37℃恒温培养。始终没有长斑。 我我检查过平板、顶层琼脂都是新配制的。KM13是感染50mlTG1菌扩增后的，请您指导下，我都做了一星期了。现在还不知道社么原因？！！ 下图是我双层琼脂法测滴度，第一张图菌么有长满，换了低熔点琼脂后生长如第二张图，图有点不太清楚，但是没有看到噬菌斑呢。  没长斑.jpg |
5楼2017-06-30 16:00:36