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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 农杆菌转化后平板上一层糊状，是染菌了吗
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌转化后平板上一层糊状，是染菌了吗 已有2人参与

我用农杆菌GV3101感受态做电转化，转化后24小时内平板上就长了一层糊状的东西，找不到单菌落，是染菌了吗，我的平板上只有质粒的抗生素，是必须要添加利福平才可以吗？
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1楼 2014-11-19 14:44:19
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种可能性非常大，一方面你可以用你的感受态做一个空白对照，看看是否生长，如果生长，那就是杂菌无疑了；另外一方面你也可以在平板周围挑去一个单菌落培养看看，进行PCR扩增验证。
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体会生活
2楼2014-11-20 13:37:24
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电转化效率很高的，你是不是转了过量的质粒，又涂了很多菌液，你用的那个菌株是必须加利福平的

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-11-20 16:35:35
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-20 16:35:35
电转化效率很高的，你是不是转了过量的质粒，又涂了很多菌液，你用的那个菌株是必须加利福平的

我加了利福平，庆大，卡娜三抗的平板转化后还是这个样子，转化时质粒加了3微升，大概120ng，涂板时只加了复苏后的200微升菌液，培养过夜后就出现了糊状的一层，有人说可能是死掉的菌体，但是会长一层吗？
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4楼2014-11-21 15:26:02
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhongmianhua at 2014-11-20 13:37:24
这种可能性非常大，一方面你可以用你的感受态做一个空白对照，看看是否生长，如果生长，那就是杂菌无疑了；另外一方面你也可以在平板周围挑去一个单菌落培养看看，进行PCR扩增验证。

恩，现已做了对照，正在等待实验结果
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5楼2014-11-21 15:26:36
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zdd5212

铜虫 (初入文坛)
楼主用的质粒是什么抗性呢
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我就是我，不一样的烟火
6楼2015-05-07 09:30:43
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rosas62

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2016-06-25 19:07:21
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Maple12345

新虫 (初入文坛)
请问楼主还记得问题怎么解决的吗？我用的冻融法，也是长满了糊状的东西，重复了好几次都这样，所以想向您请教一下怎么解决的，拜谢！
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8楼2016-09-06 16:35:33
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winslow-浮萍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Maple12345 at 2016-09-06 16:35:33
请问楼主还记得问题怎么解决的吗？我用的冻融法，也是长满了糊状的东西，重复了好几次都这样，所以想向您请教一下怎么解决的，拜谢！

我最近也遇到这样的问题，请问您已经解决了么？
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fighting力求快乐地做科研
9楼2016-10-22 14:36:59
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winslow-浮萍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by rosas62 at 2016-06-25 19:07:21
请问最后是什么原因啊？

请问你是否也遇到转化后长成糊状的问题？ 你已经找到原因了么？
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fighting力求快乐地做科研
10楼2016-10-22 14:42:05
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