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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌转化后平板上一层糊状,是染菌了吗 已有2人参与

我用农杆菌GV3101感受态做电转化,转化后24小时内平板上就长了一层糊状的东西,找不到单菌落,是染菌了吗,我的平板上只有质粒的抗生素,是必须要添加利福平才可以吗?
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种可能性非常大,一方面你可以用你的感受态做一个空白对照,看看是否生长,如果生长,那就是杂菌无疑了;另外一方面你也可以在平板周围挑去一个单菌落培养看看,进行PCR扩增验证。
体会生活
2楼2014-11-20 13:37:24
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电转化效率很高的,你是不是转了过量的质粒,又涂了很多菌液,你用的那个菌株是必须加利福平的

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-20 16:35:35
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-20 16:35:35
电转化效率很高的,你是不是转了过量的质粒,又涂了很多菌液,你用的那个菌株是必须加利福平的

我加了利福平,庆大,卡娜三抗的平板转化后还是这个样子,转化时质粒加了3微升,大概120ng,涂板时只加了复苏后的200微升菌液,培养过夜后就出现了糊状的一层,有人说可能是死掉的菌体,但是会长一层吗?
4楼2014-11-21 15:26:02
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhongmianhua at 2014-11-20 13:37:24
这种可能性非常大,一方面你可以用你的感受态做一个空白对照,看看是否生长,如果生长,那就是杂菌无疑了;另外一方面你也可以在平板周围挑去一个单菌落培养看看,进行PCR扩增验证。

恩,现已做了对照,正在等待实验结果
5楼2014-11-21 15:26:36
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zdd5212

铜虫 (初入文坛)

楼主用的质粒是什么抗性呢
我就是我,不一样的烟火
6楼2015-05-07 09:30:43
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rosas62

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2016-06-25 19:07:21
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Maple12345

新虫 (初入文坛)

请问楼主还记得问题怎么解决的吗?我用的冻融法,也是长满了糊状的东西,重复了好几次都这样,所以想向您请教一下怎么解决的,拜谢!
8楼2016-09-06 16:35:33
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winslow-浮萍

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Maple12345 at 2016-09-06 16:35:33
请问楼主还记得问题怎么解决的吗?我用的冻融法,也是长满了糊状的东西,重复了好几次都这样,所以想向您请教一下怎么解决的,拜谢!

我最近也遇到这样的问题,请问您已经解决了么?
fighting力求快乐地做科研
9楼2016-10-22 14:36:59
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winslow-浮萍

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by rosas62 at 2016-06-25 19:07:21
请问最后是什么原因啊?

请问你是否也遇到转化后长成糊状的问题? 你已经找到原因了么?
fighting力求快乐地做科研
10楼2016-10-22 14:42:05
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