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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 发酵液预处理问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jia0472

金虫 (小有名气)

[交流] 发酵液预处理问题

做生物转化实验遇到点问题，在这里向大家请教一下：我想做某一化合物被菌生物转化的动态曲线，在定时取点后，想上液相进行检测，但是我们知道，发酵液里有很多成分，如果不经过预处理，对柱子的损害大，那么预处理需要怎么做呢？另外，因为我是做动态曲线，在每个时间点取样后还有终止反应，即：使菌体内的酶灭活才行。我看到有的资料说离心后上液相，那么离心应该不会终止酶活反应吧，所以我放弃了离心的方法，打算萃取，用的是乙酸乙酯萃的，但是接下来又不知道该怎么做了，原打算取乙酸乙酯萃取液少量，用甲醇稀释，因为流动相是甲醇，样品不溶于甲醇，溶于乙酸乙酯，我还想问就是混有乙酸乙酯的样品能进C18柱吗？会不会还对柱子有损害？
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1楼 2008-05-13 13:04:56
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
沸水让酶失活．．然后直接上液相
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2楼2008-05-13 17:41:30
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jia0472

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
引用回帖:
Originally posted by chenyyy at 2008-5-13 17:41:
沸水让酶失活．．然后直接上液相

不太可取，这样会对样品有影响
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3楼2008-05-13 18:02:46
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qijilaji

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
乙酸乙酯萃取之后旋蒸，蒸干之后再加甲醇
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4楼2008-06-05 14:43:57
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
太麻烦,我们实验室是直接离心上液相的
不过误差肯定比较大
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5楼2008-06-29 20:36:57
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叶荷

木虫 (小有名气)

随便说说

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
我想也许可以先酸化一下使酶失活再上柱子吧！
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安住自在
6楼2008-07-04 15:12:10
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crayoon

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
如果酶是胞内的，高速离心后上清液中的酶应该非常少的。另外，你可以试一下，离心后的上清液放置不同时间后测一下产物变化，如果变化可以忽略那这个方法就可以用了。
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7楼2008-07-05 08:52:34
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gudaobo

银虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
引用回帖:
Originally posted by qijilaji at 2008-6-5 14:43:
乙酸乙酯萃取之后旋蒸，蒸干之后再加甲醇

加入甲醇后，振摇尽量让样品溶解，不溶的就不要了，可能是多糖、蛋白质等成分，不是您所要的生物转化的东西。
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谋定而后动
8楼2008-07-22 10:46:09
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zhengjun1981

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
离心后直接上样根本不可取,因为水中有很多蛋白质,酶,多糖等等.你必需把这些东西沉淀下来,离心取上清.如果是孢内物,你还得把你要得东西提出来.
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9楼2008-08-13 09:12:28
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zhengjun1981

木虫 (著名写手)
离心后直接上样,你测不准,而且液相柱也用不了几天就会坏.这是常识.
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10楼2008-08-13 09:15:43
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