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jia0472

金虫 (小有名气)

[交流] 发酵液预处理问题

做生物转化实验遇到点问题,在这里向大家请教一下:我想做某一化合物被菌生物转化的动态曲线,在定时取点后,想上液相进行检测,但是我们知道,发酵液里有很多成分,如果不经过预处理,对柱子的损害大,那么预处理需要怎么做呢?另外,因为我是做动态曲线,在每个时间点取样后还有终止反应,即:使菌体内的酶灭活才行。我看到有的资料说离心后上液相,那么离心应该不会终止酶活反应吧,所以我放弃了离心的方法,打算萃取,用的是乙酸乙酯萃的,但是接下来又不知道该怎么做了,原打算取乙酸乙酯萃取液少量,用甲醇稀释,因为流动相是甲醇,样品不溶于甲醇,溶于乙酸乙酯,我还想问就是混有乙酸乙酯的样品能进C18柱吗?会不会还对柱子有损害?
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chenyyy

无虫 (正式写手)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
沸水让酶失活..然后直接上液相
2楼2008-05-13 17:41:30
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jia0472

金虫 (小有名气)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
引用回帖:
Originally posted by chenyyy at 2008-5-13 17:41:
沸水让酶失活..然后直接上液相

不太可取,这样会对样品有影响
3楼2008-05-13 18:02:46
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qijilaji

金虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
乙酸乙酯萃取之后旋蒸,蒸干之后再加甲醇
4楼2008-06-05 14:43:57
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chenyyy

无虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
太麻烦,我们实验室是直接离心上液相的
不过误差肯定比较大
5楼2008-06-29 20:36:57
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叶荷

木虫 (小有名气)

随便说说

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
我想也许可以先酸化一下使酶失活再上柱子吧!
安住自在
6楼2008-07-04 15:12:10
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crayoon

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
如果酶是胞内的,高速离心后上清液中的酶应该非常少的。另外,你可以试一下,离心后的上清液放置不同时间后测一下产物变化,如果变化可以忽略那这个方法就可以用了。
7楼2008-07-05 08:52:34
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gudaobo

银虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
引用回帖:
Originally posted by qijilaji at 2008-6-5 14:43:
乙酸乙酯萃取之后旋蒸,蒸干之后再加甲醇

加入甲醇后,振摇尽量让样品溶解,不溶的就不要了,可能是多糖、蛋白质等成分,不是您所要的生物转化的东西。
谋定而后动
8楼2008-07-22 10:46:09
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zhengjun1981

木虫 (著名写手)


★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
离心后直接上样根本不可取,因为水中有很多蛋白质,酶,多糖等等.你必需把这些东西沉淀下来,离心取上清.如果是孢内物,你还得把你要得东西提出来.
9楼2008-08-13 09:12:28
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zhengjun1981

木虫 (著名写手)


离心后直接上样,你测不准,而且液相柱也用不了几天就会坏.这是常识.
10楼2008-08-13 09:15:43
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