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bcqq1990

新虫 (小有名气)

[交流] 请问FLAG beads能把IgG也结合下来吗? 已有4人参与

请问FLAG beads能把IgG也结合下来吗?最近在做IP,因为目的蛋白分子量在55KDa,但是在对照和目的条带位置都有带,就不知道那个位置拉下来的是目的蛋白还是IgG?请问做过的同学指点一下。
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该可以,而且似乎大的链刚好是那么大。
2楼2014-11-13 23:28:57
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bcqq1990

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2014-11-13 23:28:57
应该可以,而且似乎大的链刚好是那么大。

好吧  谢啦~
3楼2014-11-14 13:11:52
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
抗体稳定性那么好,纯化flag标签蛋白过程轻、重链应该不会分开吧!
4楼2014-11-14 16:32:07
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bcqq1990

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuderong at 2014-11-14 16:32:07
抗体稳定性那么好,纯化flag标签蛋白过程轻、重链应该不会分开吧!

为什么不会分开呢?
5楼2014-11-15 17:07:03
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纯化过程加了巯基乙醇之类的还原剂吗?加的话轻重链就比较容易分开。要怀疑是抗体可以做个western

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-11-15 20:06:22
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nrahouston

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是Flag antibody +protein A beads?还是Flag-Beads?
后者是把抗flag的抗体化学交联到bead上的,IP完之后,加loading buffer来煮,应该不会有很多抗体被从bead上煮下来。

你的对照是怎样设计的?
7楼2014-11-18 00:23:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用高级珠子,抗体和磁珠共价键结合,不会被洗脱。
8楼2014-11-19 13:28:43
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