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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 请问FLAG beads能把IgG也结合下来吗？
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bcqq1990

新虫 (小有名气)

[交流] 请问FLAG beads能把IgG也结合下来吗？ 已有4人参与

请问FLAG beads能把IgG也结合下来吗？最近在做IP，因为目的蛋白分子量在55KDa，但是在对照和目的条带位置都有带，就不知道那个位置拉下来的是目的蛋白还是IgG？请问做过的同学指点一下。
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1楼 2014-11-13 19:15:29
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
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应该可以，而且似乎大的链刚好是那么大。
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2楼2014-11-13 23:28:57
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bcqq1990

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2014-11-13 23:28:57
应该可以，而且似乎大的链刚好是那么大。

好吧  谢啦~
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3楼2014-11-14 13:11:52
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
★
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抗体稳定性那么好，纯化flag标签蛋白过程轻、重链应该不会分开吧！
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4楼2014-11-14 16:32:07
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bcqq1990

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuderong at 2014-11-14 16:32:07
抗体稳定性那么好，纯化flag标签蛋白过程轻、重链应该不会分开吧！

为什么不会分开呢？
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5楼2014-11-15 17:07:03
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯化过程加了巯基乙醇之类的还原剂吗？加的话轻重链就比较容易分开。要怀疑是抗体可以做个western

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-11-15 20:06:22
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nrahouston

铜虫 (初入文坛)
★
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是Flag antibody ＋protein A beads？还是Flag－Beads？
后者是把抗flag的抗体化学交联到bead上的，IP完之后，加loading buffer来煮，应该不会有很多抗体被从bead上煮下来。

你的对照是怎样设计的？
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7楼2014-11-18 00:23:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用高级珠子，抗体和磁珠共价键结合，不会被洗脱。
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8楼2014-11-19 13:28:43
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