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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

引用回帖:
7楼: Originally posted by 电风扇魏哥 at 2014-11-25 16:21:08
谢谢您的回复,非特异性结合的可能性 很大,我又换了一组一抗和二抗,二抗还是自己标记,这两株单抗都是识别不同位点,结果坐下来还是全板显色,求您指教,感激...

多设几个孔:不包被5%的脱脂奶粉封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止
不包被5%的脱脂奶粉封闭+自己标记的HRP二抗+显色+终止
不包被1%的BSA封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止
一抗+1%的BSA封闭+自己标记的HRP二抗+显色+终止
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11楼2014-11-26 10:12:52
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

不知道抗体溶度你是怎么确定的,确定你的最适抗体浓度。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
12楼2014-11-26 10:26:03
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电风扇魏哥

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-26 08:42:12
还有一种可能就是你的包被的抗体,和你标记的二抗发生了交叉反应
...

谢谢您,我的实验设计就是“包被一抗+封闭+阴阳血清和空白对照+HRP标记的二抗+显色+终止”。我之前也是用0.05%的pbst洗的,后怀疑是不是洗板液的问题才换了0.2%pbst。一抗和二抗我也做了梯度,从小到大,可还是不行,都显色。您说如果一抗和二抗发生了交叉反应,这样该怎么解决呢?万分感谢,
13楼2014-11-26 23:33:11
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我是钢镚

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你没有说明一抗来自什么动物,二抗来自什么动物,
14楼2015-01-03 19:02:19
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

很过可能是你的封闭液和你标记二抗发生交叉反应了,你试试用你的封闭液直接包被板,然后加你的标记二抗,看看会不会产生OD值。
15楼2015-01-20 10:55:59
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电风扇魏哥

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by long20081990 at 2014-11-18 11:14:21
空白都显阳性首先确定你这组实验错误。
原因第一:加二抗后洗了没。
      第二:如果洗了,那就说明二抗交联上去了,有可能封闭液过期了,或者封闭液没有封闭上(时间,温度等)。
     第三:很多时候有一些抗体 ...

16楼2015-04-24 09:30:15
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yy122465518

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你的空白都是阳性的话,那就只能说明是你的一抗和二抗是结合的,但是双抗体夹心法的一抗和二抗只是针对抗原的不同表位,不会相互结合。建议跟换抗体。
17楼2015-05-04 13:31:26
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