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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双抗夹心ELISA方法的建立
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心
引用回帖:
7楼: Originally posted by 电风扇魏哥 at 2014-11-25 16:21:08
谢谢您的回复，非特异性结合的可能性 很大，我又换了一组一抗和二抗，二抗还是自己标记，这两株单抗都是识别不同位点，结果坐下来还是全板显色，求您指教，感激...

多设几个孔：不包被5%的脱脂奶粉封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止
不包被5%的脱脂奶粉封闭+自己标记的HRP二抗+显色+终止
不包被1%的BSA封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止
一抗+1%的BSA封闭+自己标记的HRP二抗+显色+终止
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11楼2014-11-26 10:12:52
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

不知道抗体溶度你是怎么确定的，确定你的最适抗体浓度。
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12楼2014-11-26 10:26:03
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电风扇魏哥

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-26 08:42:12
还有一种可能就是你的包被的抗体，和你标记的二抗发生了交叉反应
...

谢谢您，我的实验设计就是“包被一抗+封闭+阴阳血清和空白对照+HRP标记的二抗+显色+终止”。我之前也是用0.05%的pbst洗的，后怀疑是不是洗板液的问题才换了0.2%pbst。一抗和二抗我也做了梯度，从小到大，可还是不行，都显色。您说如果一抗和二抗发生了交叉反应，这样该怎么解决呢？万分感谢，
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13楼2014-11-26 23:33:11
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我是钢镚

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你没有说明一抗来自什么动物，二抗来自什么动物，
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14楼2015-01-03 19:02:19
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

很过可能是你的封闭液和你标记二抗发生交叉反应了，你试试用你的封闭液直接包被板，然后加你的标记二抗，看看会不会产生OD值。
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15楼2015-01-20 10:55:59
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电风扇魏哥

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by long20081990 at 2014-11-18 11:14:21
空白都显阳性首先确定你这组实验错误。
原因第一：加二抗后洗了没。
      第二：如果洗了，那就说明二抗交联上去了，有可能封闭液过期了，或者封闭液没有封闭上(时间，温度等）。
     第三：很多时候有一些抗体 ...

16楼2015-04-24 09:30:15
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yy122465518

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你的空白都是阳性的话，那就只能说明是你的一抗和二抗是结合的，但是双抗体夹心法的一抗和二抗只是针对抗原的不同表位，不会相互结合。建议跟换抗体。
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17楼2015-05-04 13:31:26
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