应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双抗夹心ELISA方法的建立
52/1返回列表
查看: 1556  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

电风扇魏哥

金虫 (正式写手)

[求助] 双抗夹心ELISA方法的建立 已有6人参与

我做双抗夹心ELISA时遇到下面的情况，求高手指教“一抗+5%的脱脂奶粉封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止“，结果阴性和空白都呈阳性，能不能帮忙分析分析是什么原因造成的？？？？？？？？？？
一抗和二抗都是由本实验室自己制备的！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-11-13 15:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

电风扇魏哥

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-26 08:42:12
还有一种可能就是你的包被的抗体，和你标记的二抗发生了交叉反应
...

谢谢您，我的实验设计就是“包被一抗+封闭+阴阳血清和空白对照+HRP标记的二抗+显色+终止”。我之前也是用0.05%的pbst洗的，后怀疑是不是洗板液的问题才换了0.2%pbst。一抗和二抗我也做了梯度，从小到大，可还是不行，都显色。您说如果一抗和二抗发生了交叉反应，这样该怎么解决呢？万分感谢，
赞一下 回复此楼
13楼2014-11-26 23:33:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-25 17:32:20
封闭或非特异性结合······
赞一下 回复此楼
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
2楼2014-11-14 21:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiguyuan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-25 17:32:30
电风扇魏哥: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-05-04 14:53:43
第一，你的阴性血清是从哪里来的？这些东西不能自己随随便便制备，需要从正规科研所购买
第二，你的二抗是是否确实标记上了，是否验证能否显色，可能是你中间的步骤不合理，我们没有看到这个关键的标记步骤不能随便下结论
第三，你的显色液是否用二抗证明有显色，如果没有，可取少量显色液加入少量二抗证明之
第四，你的包被蛋白用的包被液是什么成分，一般情况下是碳酸盐  ，另外是否证明已经包被上了？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-15 07:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long20081990

新虫 (初入文坛)
空白都显阳性首先确定你这组实验错误。
原因第一：加二抗后洗了没。
      第二：如果洗了，那就说明二抗交联上去了，有可能封闭液过期了，或者封闭液没有封闭上(时间，温度等）。
     第三：很多时候有一些抗体会出现一抗与二抗直接交联的情况（应该很上吧，但我就碰到过一次，实在洛阳百泰科买的）。
     第四：你必须确定你空白是不是加错了。
     第五：显色剂变质了，我最开始做的时候TMB自配就出现过这种问题，它自己都变色了。
如果你的实验操作正确的话，应该是没封闭好吧（或者你的脱脂奶风有问题啊，买点BSA 试试便宜的。其它原因你在做实验的时候很容易就发现了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2014-11-18 11:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭