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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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胡化静

木虫 (小有名气)

[求助] 建库-电转率过低 已有2人参与

自制超级感受态的转化率达到10的10次方了，但是电转连接产物后长的克隆就不多了，一次才10的4次方，远远达不到建库的要求。载体是pCANTAB 5E,酶切位点是SfiI和NotI，连接比例1：3，用的NEB的连接酶。有没有人能帮忙分析一下？还有，有没有人做连接的时候还另加ATP的？
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啦啦啦
1楼 2014-11-12 22:02:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这很明显，连接那步没搞定

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2楼2014-11-13 21:59:20
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胡化静

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-13 21:59:20
这很明显，连接那步没搞定

该从哪些方面进行优化啊？
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啦啦啦
3楼2014-11-15 13:00:23
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
胡化静(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:42:00
胡化静: 金币+5, ★有帮助 2014-11-15 22:01:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by 胡化静 at 2014-11-15 13:00:23
该从哪些方面进行优化啊？...

我用的是NEB的连接酶，不过现在建库直接做同源重组了

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4楼2014-11-15 13:03:28
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胡化静

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-15 13:03:28
我用的是NEB的连接酶，不过现在建库直接做同源重组了
...

我也用的NEB的，，怎么就是不行呢。
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啦啦啦
5楼2014-11-15 22:01:04
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xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
胡化静: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-12-08 12:18:25
连接比例不太合适。质粒和片段的比例可以是1:7-1:9等。对质粒和目的基因片段要求比较高。
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6楼2014-12-03 21:17:18
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胡化静

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xissy at 2014-12-03 21:17:18
连接比例不太合适。质粒和片段的比例可以是1:7-1:9等。对质粒和目的基因片段要求比较高。

嗯我再试试，目前只试了1：5.
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啦啦啦
7楼2014-12-08 12:18:12
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xissy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 胡化静 at 2014-12-08 12:18:12
嗯我再试试，目前只试了1：5....

片段要尽可能的浓。做建库的酶连产物不需要多，但要尽量的好。高质量的酶连产物10ul足以。
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8楼2014-12-08 14:13:11
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chanyu1991

新虫 (小有名气)
能分享一下protocol吗？万分感谢！！小白一枚

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9楼2018-01-20 23:13:39
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